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标题: 我的小鼠MSCs [打印本页]

作者: gact 时间: 2011-5-9 21:19 标题: 我的小鼠MSCs

D9的小鼠MSCs7 L- a& h" s) A
% G! s6 X5 `4 [4 d$ ^* |
现在还是这么稀稀拉拉，，不均匀，，皿的中央比较密集，融合了，，，周围稀稀落落，，要不要消化传代了？ B% K+ o. X: u. h& G* S6 B

已经两天没有换液了。。怎么办？$ {4 R0 R5 M4 G! m+ a

没有加EGF，是两只老鼠股骨骨髓合在一起的，，用的是60mm的皿。

贴壁法。。

作者: gact 时间: 2011-5-9 21:21

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作者: gact 时间: 2011-5-9 21:22

细胞，，中间有大大的“细胞”，，，是什么啊？？？

作者: gact 时间: 2011-5-9 21:22

今天不换液，，就会死了吧？？？

作者: iceyang 时间: 2011-5-9 21:50

大大的看上去不像细胞，可能是杂质，也有可能是细胞团块。中间的太密的话就应该传了，下次做原代的时候应该种在培养皿上之后轻轻的晃一晃，这样细胞可以在皿上分布的均匀点，建议你一传二。另外小鼠的BMSC的确不好养的。

作者: biotly 时间: 2011-5-9 22:04

还要再长一下，可以先换一半的培养基，不要全换，过两天再传。

作者: aoppolle 时间: 2011-5-9 22:32

建议胰酶消化一下，培养液重新悬一下，让细胞均匀铺在培养皿

作者: biotly 时间: 2011-5-9 22:48

是不是等下一代传代的时候注意一下啊，这一代就算了，刚开始原代的细胞还是少消化的为好！图上的细胞也并没有长得太密，MSC消耗营养也不多，换半液长两天没问题！

作者: xiaozhu86 时间: 2011-5-10 13:40

应该是还不能传代，密度不够，小鼠的BMSC密度依赖性较高，半定量换液两到三天换一次问题都不大~原代状态不好，传代之后有长好的可能性，但多数感觉还是不好，所以就再养养看吧~

作者: gact 时间: 2011-5-10 14:39

回复 xiaozhu86 的帖子

前3天，圈全量换液，去除悬浮细胞；
后来都是半量换液的；
第8天时，连续两天没有换液；; W+ @9 F/ f7 Q
打算今天第10天半量换液；5 D6 P2 A: Z; _4 u2 V+ X
不加b-FGF，没关系吧；: L+ M* G% V$ d/ G6 K! p
大家用的是sigma 人的 b-FGF么？

作者: xiaozhu86 时间: 2011-5-10 16:53

回复 gact 的帖子" l ^8 I" t0 K$ l4 Y4 W; ~" D: Q
4 E; Q: d; O$ F% n h8 K! K I
我们这边的养的C57一直没有加过b-fgf，原代也都是72小时第一次换液，一直半定量，基本是两天一换，鼠龄一般是四到六周左右的~

作者: xwzy 时间: 2011-5-10 23:14

如果周围很稀，但中间已经融合，不传代中间的细胞不会分化吗？

作者: nihaohao 时间: 2011-5-11 15:26

可以传代，也可以再养几天

细胞状态还可以，0 q) V7 d! s" V1 L* r
若要传代，如果密集的地方比较少，可以一传一。若密集的地方较多，可以一传二。如果细胞太少，细胞不容易长起来，容易分化。

作者: beginner 时间: 2011-5-12 10:52

这个密度还可以再长一下，另外MSC挺容易聚堆的。越密长的越快。

作者: gact 时间: 2011-5-12 23:23

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作者: gact 时间: 2011-5-12 23:26

D11的照片。* b- w9 N) x! ~ ^: d) X
1. 在某个角落，细胞实在太密了，，怎么办，其中大细胞==是什么。血液细胞？
2，怎么越来越多的直线产生了，，这是什么现象？

作者: 若兰汀 时间: 2011-5-16 10:48

我感觉你的细胞活性不是很好，首先你要确定你分离的是间充质细胞，至少它是优势细胞群；然后就是你的细胞密度这么小，很难长起来，如果48小时后还没有长密的迹象就很容易老化了。小鼠的MSC比起人的或是大鼠的显得很脆弱，培养基中需要额外添加L-谷氨酰胺，对于FGF及EGF我个人不建议你添加，这两个组分常用于神经细胞诱导时使用，我那他们来诱导Nestin的表达，很难说他会不会诱导间充质分化。

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