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标题: 新手求助，请来看看我养的胚干出什么问题了 [打印本页]

作者: wang66 时间: 2011-5-12 10:47 标题: 新手求助，请来看看我养的胚干出什么问题了

之前自己和实验室里从来没养过胚干，老板有意要往此方向研究，也只有硬着头皮边尝试边烧钱了

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这是刚拿来养了3天的图片，感觉那个时候的细胞状态好像不太好，而且也有分化., _) R5 A& H7 y7 h4 N% X7 X
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作者: wang66 时间: 2011-5-12 10:49

然后这是继续养了5天之后的图片，感觉细胞全部都死了，都有空洞了···
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请各位一起来帮我分析一下，是什么原因，先谢过啦~

作者: juan880929 时间: 2011-5-12 12:04

是人的胚胎干细胞还是小鼠的

作者: jefferson 时间: 2011-5-12 12:45

不是相差照片,不能准确判断状态以及MEF的状态# u! x, n* ~- a' _1 b

从这些照片看, 3天的克隆中,照片1和2中的克隆还行,但是作为3天时候的, 克隆太大了, 这样长到5天后克隆容易分化, 建议传代时克隆再小些. 照片3中的克隆焦距没对准, 不能判断; 照片4种的克隆中间已经有分化迹象, 建议可以用机械法把中间隆起发黄的部分挑除. " G. Q. F/ R* x2 i$ x1 }6 ]
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5天的克隆中, 照片1和3的克隆已经出现分化, 照片2的焦距不是很准, 目测有部分也开始分化了,但大部分还是未分化的, 如果出现这种状况, 应去除分化部分,尽快传代. 2 H3 K' `2 R4 T% R( A/ f
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不能判断MEF的状态好坏, 不过MEF的密度可以稍微再高点.0 V9 ^& v+ N/ T* z( D$ e
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建议把整个培养体系和过程发上来分析

作者: stonelee2050 时间: 2011-5-12 12:57

细胞状态不好啊，貌似是分化了。加大MEF量，培养基里加上青霉素链霉素。

作者: 是鸟就要去飞 时间: 2011-5-12 15:19

你的细胞太差了，边缘性都没有了，而且分化了。建议你好好看看论坛里别人发的养干细胞的方法

作者: rongrong 时间: 2011-5-12 15:20

感觉MEF的密度有点低，干细胞的边界还算清晰，但中间有空洞，可能是克隆太大的原因

作者: nculsa747 时间: 2011-5-16 13:49

增大MEF密度,问题即可解决！

作者: cony 时间: 2011-5-17 19:21

已分化

作者: 花开次第 时间: 2011-5-17 19:52

MEF的单层密度有些稀，一般来说小鼠ES的单层密度80%才好。人的ES单层密度要求更高。而且细胞的克隆太大就会有分化的迹向，要及时传代才好！

作者: czzhaozhu 时间: 2011-5-27 16:17

人ES细胞培养要比小鼠ES的难掌握，从图片来看，feeder的密度太稀了，而且总感觉你的人ES开始时状态就不是很好，集落立体感不强；至于后面，细胞不仅分化了，而且死亡得很多。所以可能存在2方面的原因：feeder和ES本身状态。

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