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标题: 为什么培养基一放到培养箱里一小时就变黄了 [打印本页]

作者: zxdlala 时间: 2011-5-12 15:48 标题: 为什么培养基一放到培养箱里一小时就变黄了

分离细胞的时候就这样，还以为是操作时候污染了，后来只弄了点培养基装到培养瓶里面放到孵箱里，还是不到一小时就变黄了，怎么回事啊

作者: dulaiyouyu 时间: 2011-5-12 15:53

培养基的缓冲系统不好吧。有加NaHCO3么？

作者: zxdlala 时间: 2011-5-12 16:14

是买成瓶的hylone的，就加了点血清，然后调了下ph值，用稀释后的NAOH调的。别的什么都没加，以为是支原体污染了，因为液体都很清亮，但是在外面就没事，一放到孵箱里就变黄了，再拿出来又变红了

作者: 殆死悲爱 时间: 2011-5-12 16:48

缓冲液加得少了

作者: HMC 时间: 2011-5-12 18:04

缓冲液的问题

作者: 生物化学zy 时间: 2011-5-12 21:51

个人见解:是缓冲体系的问题.一般培养液中的缓冲体系应该是NaHco3,使用酚红为指示剂.培养液偏酸会变黄,偏碱会变紫.同时培养箱也可以进行自动的调节,培养液在超净台中开盖放一段时间会变紫色,放在培养箱中会自动变回来.我们实验室使用gibco的DMEM,需要添加NaHCO3

作者: amberma 时间: 2011-5-12 22:38

建议检查下培养箱的CO2是否正常

作者: genedu 时间: 2011-5-13 01:51

属于正常问题，PH的改变必然会导致颜色的改变

作者: jhu132llh 时间: 2011-5-13 10:23

培养箱中5%的CO2" D* j) n4 D3 `" P9 q: m
培养基放进去以后PH肯定会改变2 F1 Y1 n9 e8 q' f( D6 {
所以肯定会变色的

作者: zhangyan813 时间: 2011-5-13 10:52

有那么明显吗，从培养箱中一拿出来就变红？我用的一种无血清干细胞培养液就是黄色的，一开始以为哪里出了问题，后来测了PH值一切正常，用来养细胞也很好的。但是这个黄色是很稳定的，不会很快的变化，所以我认为楼主的培养液应该是缓冲系统的问题。建议楼主：1.拿一点其他经典细胞试一下这个培养液，看看有什么影响；2. 换培养也，买GIBCO的粉剂自己配制，这样会好很多。

作者: 肉丁 时间: 2011-5-13 13:58

如果颜色像楼主所说的变化，应该就是溶液缓冲体系有问题，这样对细胞是有一定损害的，pH大幅度改变对细胞生长的影响就不用说了，个人建议还是用NaHCO3吧，呵呵，新手上路，还得学习

作者: aibi1983 时间: 2011-5-14 13:08

我认为是缓冲液的问题，若PH已调整到7.0-7.4之间，并且培养箱CO2为5%，那就说明是细胞代谢较快

作者: 农夫有点田 时间: 2011-5-14 16:30

缓冲体系有问题我们家的也是NaHCO3 楼上说得很好我再补充一点你用的二氧化碳孵箱 CO2的浓度有没有问题啊？是不是太高了啊？使得液偏酸啊？测测孵箱 CO2浓度吧 ( J3 L' j5 Y) ^6 C: ]9 Y7 D

作者: zxdlala 时间: 2011-5-15 20:45

培养箱我想应该没问题吧，里面的L-DMEM养的和我一样的细胞都几天都还是红的。
如果是缓冲体系有问题的话怎么调整啊，加点碳酸氢钠就行了吗？要加多少啊

作者: zxdlala 时间: 2011-5-15 20:47

今天我又弄了点不加血清的培养基放里面了，排除一下血清的问题。
血清解冻后放4度里有好几天才配的，但是是密封的，应该不会有支原体污染吧

作者: 透明微笑 时间: 2011-5-15 20:59

偏酸会变黄，一是检查培养箱，二是检查培养液

作者: hygene 时间: 2011-5-16 08:21

如果肯定没有污染的话，可以考虑两个方面的问题：1.缓冲体系，一般用NaHCO3 ，甚至有的可以适当加HEPES；2 检测培养箱 CO2的浓度有没有问题，重新调试一下。

作者: hehe100 时间: 2011-5-16 08:50

第一要看你黄的程度，如果不高的话，可能属于正常情况。如果黄的程度比较厉害的话，说明你的系统可能没有加入PH缓冲剂，如NaHCO3或者HEPEs

作者: yxwfly 时间: 2011-5-16 09:34

只调ph值不管用吧，建议用hepes缓冲剂5 b2 ~( D: z* ?( X. E+ v' p

作者: zxdlala 时间: 2011-5-16 09:57

回复 hygene 的帖子1 D/ c/ Z5 D* z1 i- g

hyclone的培养基里面含的有HEPES啊，到底是怎么回事啊，耽误好几天了

作者: zxdlala 时间: 2011-5-16 10:43

支原体污染培养基会不会变黄呢？1 b6 m% l% \4 M' B$ @& ^4 U
但是也不应该啊，在瓶子就没事，一放入培养箱就变黄，也不知道是血清的问题还是培养基的问题。

作者: zxdlala 时间: 2011-5-16 10:45

zhangyan813 发表于 2011-5-13 10:52 ) A# ~ ^6 d1 U: e: }0 P
有那么明显吗，从培养箱中一拿出来就变红？我用的一种无血清干细胞培养液就是黄色的，一开始以为哪里出了问 ...

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所谓的经典细胞是哪一种细胞啊？" k; _1 H1 e% z' g+ S& P' U: F

作者: hygene 时间: 2011-5-17 08:27

回复 zxdlala 的帖子* S. m/ m$ h6 _1 Y' l! V$ [

不知道你的培养液中NaHCO3加的是多少？这个也很重要。

作者: have-a-rest 时间: 2011-5-17 10:55

很快变黄估计是CO2超过6-7%了，测一下。6 H" y; y6 a L
还有是否加了NaHCO3？

作者: idealgas 时间: 2011-5-17 14:42

缓冲体系的问题。用的是gibco的粉末吧，我记得里面是有碳酸氢钠的，可以添加一定量的hepes作为缓冲。这个量我不记得了，不配液好久了，用的都是成瓶子的Gibco培养基~~但是这成瓶的也没一小时箱子里就变黄了啊，倒是在室外操作时间长了会变得更红。另外如果怕是支原体污染，那就用hoechst 染色下，一下就看出来了。

作者: xiangchou812 时间: 2011-5-20 15:49

肯定是缓冲体系的问题。培养箱里CO2浓度为5%，所以放里面以后pH会低点，但不至于像你说的那样那么明显吧？

作者: xiangchou812 时间: 2011-5-20 15:51

本帖最后由 xiangchou812 于 2011-5-20 15:52 编辑 0 ^9 X0 V8 g) ?" m- h/ `( R( p7 ]! x
# k, I- R* O/ M7 a6 C
你可以等变黄后测一下pH，如果太低就不行了。
我觉得你要是在空气中操作时间长的话可以考虑用一下添加HEPES作缓冲体系的培养液。缓冲能力要强很多。

作者: 宗介 时间: 2011-5-21 00:31

应该是缓冲液的问题换一个缓冲液试一下

作者: 林艳841014 时间: 2011-6-30 07:22

请问一下：问题现在解决了吗？我现在也遇到同样的问题，我估计是CO2的浓度不准确了啊。而且变黄的培养基放在培养箱没事，如果有细胞就会一段时间后污染。

作者: bllx58 时间: 2011-6-30 09:52

一个小时就变了，确实不正常
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建议认真检查你的培养箱，CO2指示栏数据会不会变化，是否准确等

作者: pla269 时间: 2011-7-1 02:59

成品hyclone的DMEM还需要加Nahco3吗

作者: huangcong1988 时间: 2011-7-1 09:04

本帖最后由 huangcong1988 于 2011-7-1 09:07 编辑 6 k, ~9 `/ Q8 ]; q, ?) M

应该是培养箱有一定温度，能够促进培养基中的弱碱性物质分解，PH降低，变为弱酸，酚红显示黄色；拿出来以后温度降低，PH又恢复弱碱性，酚红变红。还有二氧化碳浓度对于培养基的PH有影响，与温度的影响一致的，而且温度和二氧化碳对于该化学平衡的影响都是可逆的，所以培养基放入培养箱中变黄，拿出来又变红。但是如果变得很黄的话，那就是培养基缓冲体系或者培养箱条件的问题了，二氧化碳浓度太低，或者你的培养基中碳酸氢钠不够

作者: mason658616 时间: 2011-7-1 15:31

挺正常的啊，培养箱里CO2浓度高于外界空气，PH偏酸。你把培养基在外面敞开盖时间久了就变粉红色的，所以在操作的时候尽量用完一次就盖上盖子。

作者: sizhengliu 时间: 2011-7-3 15:40

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请问你们的DMEM加NaHCO3的比例是多少呢？谢谢

作者: 突击兵之小土豆 时间: 2011-7-4 15:53

应该是PH发生改变了，由于细胞培养产生一些二氧化碳，溶于培养基，而PH缓冲剂的调控能力有限，指示剂显色，说明培养液中二氧化碳浓度含量较大，我猜是这样。没威望，给点威望我下东西。

作者: sdyinong 时间: 2011-7-4 22:21

看看细胞的生长状况怎么样，如果正常那就没什么大问题，可能是培养基本身的问题，酚红应该也有不同的种类，不同的培养基的颜色本身也有差别，关键看细胞的生长状态

作者: rain2402 时间: 2011-7-5 14:31

缓冲液的问题，导致PH值在不同温度有所不同。

作者: 林艳841014 时间: 2011-7-5 21:54

请教楼主：现在这个问题还没有解决吗？我之前跟您遇到的问题一模一样，我感觉是培养箱调控CO2浓度的问题。因为我用的是NaHco3 3.7g/L，培养基一直都是自己配置的，应该是培养箱内CO2浓度不准确了。我们联系了厂家，厂家还没有派人来修。

作者: linchee 时间: 2011-7-5 22:31

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应该是培养基的酸碱性发生了改变，里面的酚红是指示剂。应该是遇酸（低PH）就变黄吧。

作者: zhuzhentulip 时间: 2013-3-13 09:39

回复 amberma 的帖子

就是CO2浓度太高了

作者: xiaolong 时间: 2013-3-13 09:52

回复 zxdlala 的帖子; M+ T' U: _7 U0 A6 G/ \
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不可思议，不到一个小时就变黄了，还没遇到过

作者: apai2003 时间: 2013-3-13 15:17

我们以前遇到过这种情况，是培养箱探头损坏导致CO2浓度太高的缘故！

作者: 只因偶然 时间: 2013-3-13 16:20

说缓冲液问题的人真多，说CO2浓度的人也有，用方法验证一下就是了。1、培养液不变，不接种细胞，一个是通入5%CO2，另一个同等条件不通入CO2，观察颜色是否会变，如果会变一个说明跟CO2有关，属于正常现象；如果两个都变，则说明跟CO2无关，考虑培养液中缓冲体系的问题，实验组用买来的培养液，对照组用自己配制的培养液，放置一段时间对比可得出结果；如果两个都不变色，说明跟细胞有关，那你就接种不同的细胞培养做对比，找出原因，相信你一定能找出原因的。
我个人认为是CO2的原因，因为我做过了实验

说这么多是教你如何去分析问题，当然这只是抛砖引玉，相信还有更好的方法，望大家解惑，鞠躬退下。

作者: 只因偶然 时间: 2013-3-13 16:20

说缓冲液问题的人真多，说CO2浓度的人也有，用方法验证一下就是了。1、培养液不变，不接种细胞，一个是通入5%CO2，另一个同等条件不通入CO2，观察颜色是否会变，如果会变一个说明跟CO2有关，属于正常现象；如果两个都变，则说明跟CO2无关，考虑培养液中缓冲体系的问题，实验组用买来的培养液，对照组用自己配制的培养液，放置一段时间对比可得出结果；如果两个都不变色，说明跟细胞有关，那你就接种不同的细胞培养做对比，找出原因，相信你一定能找出原因的。/ p; k2 \$ J' i A) m
我个人认为是CO2的原因，因为我做过了实验

说这么多是教你如何去分析问题，当然这只是抛砖引玉，相信还有更好的方法，望大家解惑，鞠躬退下。

作者: zhang861006 时间: 2013-4-1 15:46

这要看是你以前常用的培养液，还是新买的类型，有些培养液比如一些无血清培养液可能因为缓冲体系的原因，变色特别快，但是并不影响生长的

作者: 新疆八钢 时间: 2013-4-1 18:12

回复 zxdlala 的帖子4 K* _2 L0 d. e6 k+ s! E
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培养液的颜色与缓冲体系和培养条件有关系，如果你的培养液中的缓冲体系无问题，建议你查你实验室培养箱的CO2浓度，一般培养箱要定期校正，保证CO2显示浓度和培养箱内CO2浓度符合，你可以和厂家联系，费用不高，能够保证培养箱培养条件的稳定。

作者: qkzhang 时间: 2013-4-3 15:42

可能随着细胞的增殖，细胞内乳酸大量分泌出细胞外，导致培养液的pH值发生变化，这样可使培养液迅速变色

作者: yizuiqiannianga 时间: 2013-4-9 12:02

缓冲体系的问题' K8 g0 n! O4 r# A6 \

作者: 250286645 时间: 2013-4-17 10:34

是不是培养箱的问题呢有时候CO2浓度异常也会这样哦

作者: wf78365421 时间: 2013-4-17 11:22

PH值得原因

作者: bin 时间: 2013-4-27 09:56

正常的培养基在培养箱里放久了是会变得偏黄的，在室温中培养基pH约是7.2，在5%环境中就会下降到7.0左右。成瓶的培养基添加血清后就不要再调pH值了，直接使用就可以了。

作者: bin 时间: 2013-4-27 09:58

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还有就是培养基的pH值不是用氢氧化钠调的，是用碳酸氢钠调的。

作者: BDFCM 时间: 2013-6-7 21:18

还是觉得你的培养箱CO2浓度有问题，该找工程师来测一下了。
此外你看看同是在养的其他细胞的情况如何？如果其他细胞正常，那可能是你的培养液的问题了，缓冲能力差。

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