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标题: 求助大鼠BMSC原代培养问题 [打印本页]

作者: 759512199 时间: 2011-5-19 13:05 标题: 求助大鼠BMSC原代培养问题

各位大侠，大鼠BMSC的原代培养会产生克隆样的生长，大家是继续养还是传代啊？继续养会不会长老了，传代会不会太稀了？

作者: babyzeng 时间: 2011-5-19 13:27

BMSC本身就是克隆样生长的啊，骨髓中MSCs占有的比例是十万分之一左右。按10的七次方的细胞密度种植也就百来个细胞，最后都是一个一个克隆增殖出来的啊。

作者: 759512199 时间: 2011-5-19 19:09

回复 babyzeng 的帖子9 A& e8 ?) [! ?* B0 k0 h

那你是一直培养直到长满整个瓶，还是一星期左右传代？

作者: babyzeng 时间: 2011-5-19 20:13

不要等到长满，大约50~60%就该传代了。

作者: ljj0558 时间: 2011-5-20 08:59

建议不要长满，克隆中间细胞稍密集就可以传代了，我习惯是这样

作者: taxuewuge 时间: 2011-5-28 22:47

我们实验室老师要求长到85%才传代，建议传代时不要用离心法，那样对细胞伤害太大，导致传代后细胞生长慢。我已经吃过亏了。

作者: 骨道边 时间: 2011-6-2 13:22

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不用离心法那应该用什么方法呢，因为我估计过两天细胞长出来也要传代了，急求！谢谢了

作者: taxuewuge 时间: 2011-6-2 17:54

倒掉培养基，用D-Hank's洗三遍，加3ml胰酶，待细胞80%变圆后，加5ml培养基将变圆的细胞吹打下来，然后分装成两瓶，第二天全换液

作者: 骨道边 时间: 2011-6-2 22:13

好的，今天看了一下细胞，还是没有长成一片啊，都是小范围的发展，好像各自为政似的。心里很是着急啊，我这两天换液的时候都是用pbs一直冲它，希望把瓶底的杂质吹干净可效果还是不怎么的。不知道什么时候能长成气候，别等到细胞都衰老了都不能传代。自我认为还是第一次半量换液的时间有点长了，搞得那些不是干细胞的杂细胞也给贴壁了现在就很难冲下来了

作者: iceyang 时间: 2011-6-3 01:15

80%融合即可传代

作者: 1301918986 时间: 2011-6-3 08:44

BMSC的原代是克隆样生长的，但传代后就不会了，而是均匀分布生长。由于原代是克隆样生长，当局部已经长得很满的时候，我觉得还是及时传代的好，而不要让其继续生长至满瓶。

作者: jj2570782 时间: 2011-6-3 08:44

原代的杂细胞很多，不需要融合到80%，其实也很难融合到80%，因为杂细胞会占用一些空间，细胞克隆只在细胞附近，不能较大范围的延伸。所以建议养个10天左右（差不多融合50——60%）就可以传代了，离心的时间可减少一点，一般1000r/min，对细胞影响不大的

作者: 骨道边 时间: 2011-6-3 15:29

我的估计现在只有50%左右，而且瓶底不是很干净

作者: 1301918986 时间: 2011-6-3 17:01

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BMSC原代本身就是克隆样生长，当其克隆中心已经有些密集时就可以传代了。若细胞量少的话，可以接种到小一点的容器里面。

作者: 1301918986 时间: 2011-6-3 17:03

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一星期差不多可以传代了。

作者: zlh0206 时间: 2011-6-3 19:43

一般80%左右传代

作者: lizhiyong 时间: 2011-6-3 19:55

大鼠BMSC出现克隆生长是很正常的；在分离细胞时，过下200目得网，很有效避免。有克隆了，应继续培养该皿直到长满约70-80%左右再传不迟。试下，兄弟。。。

作者: nihaohao 时间: 2011-6-4 21:40

原代MSC 一般都是不均匀的长。我以前都是在克隆长的较大，里面细胞较密时1传2传代。若觉得细胞克隆不是很多，传代时可以1传1。

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