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标题: 关于细胞培养 [打印本页]

作者: 丁子 时间: 2011-5-20 00:54 标题: 关于细胞培养

本帖最后由丁子于 2011-5-20 00:55 编辑 , X& R" z7 x* v V( c
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在细胞培养的过程中，细胞的状态开始变得不好，想去掉不好（比如细胞老化，生长不好）的这部分细胞，留下状态比较好的细胞继续培养或传代，请问大家遇到有过这种情况吗？想请教大家又是怎么做的呢

作者: pauldong 时间: 2011-5-20 04:45

如果你养的是贴壁生长的细胞就很简单，换液，将未贴壁的死细胞和旧培养液一起倒掉，加入新鲜培养基就可以了，如果是悬浮生长细胞，就麻烦点了，也可以通过换液去除，离心洗涤，离心力要掌握好

作者: xiangchou812 时间: 2011-5-20 09:36

如pauldong所言，贴壁生长的细胞通过换液即可。另外，生长状态好的细胞贴壁应该也要快点吧，差速贴壁也应该可以尝试一下。
悬浮生长的细胞，就得通过离心了

作者: SCNT 时间: 2011-5-20 11:13

通过换液可以将死亡或质量比较差的细胞驱除

作者: dulaiyouyu 时间: 2011-5-20 13:02

贴壁细胞直接去液，PBS漂洗之后换新培养基就可以。$ g& S5 n4 t6 I |: t. M* B ]

悬浮细胞，如果很难掌握离心速率的话，建议可以摇晃或者吹打细胞，静置个几分钟，一般死细胞密度较低，不容易沉降。: [' ]1 c! u' G7 [8 {. |
小心吸去即可。

作者: 丁子 时间: 2011-5-20 14:10

回复 pauldong 的帖子, X0 [) s5 F5 z6 e1 k9 F

是贴壁细胞，但是生长不好的这部分也是贴壁的，我说的生长不好是指细胞的形态不及一起那么好，有老化的迹象，这种情况下，只想保留生长状态好的部分，有什么建议？谢谢

作者: 丁子 时间: 2011-5-20 14:11

回复 xiangchou812 的帖子

谢谢

作者: 丁子 时间: 2011-5-20 14:14

回复 xiangchou812 的帖子6 D1 T3 I9 j& I/ ?2 k/ ?

谢谢

作者: zhusealin 时间: 2011-5-20 15:07

有限稀释法亚克隆

作者: 细胞海洋 时间: 2011-5-20 15:31

回复 zhusealin 的帖子

能解释一下吗

作者: yangpan521 时间: 2011-5-20 15:36

不知到你说的细胞不好是指那种情况，是长的慢

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2 H5 f H8 F" G$ x8 D5 I- f4 Z$ N
不知道你指的细胞养不好是指那种情况，是长得慢？细胞成团生长？还是死细胞较多？建议说的明确点，最好传个图片

作者: lifeida 时间: 2011-5-20 16:15

在倒置显微镜下，用mareker笔把不好的细胞打个圈标记好，然后拉跟针，在超净台内，体视显微镜下，把打圈标记的细胞戳起来，然后换液！

作者: 丁子 时间: 2011-5-20 21:36

回复 zhusealin 的帖子+ H6 Y( u) e7 i1 B, ~5 b! c+ O0 h, b
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能介绍一下具体步骤吗？

作者: 丁子 时间: 2011-5-20 21:41

回复 zhusealin 的帖子 b' j% f) M6 \5 I6 X& O( `4 F* R

能介绍一下具体的步骤吗？网上也查到有这种做法，但是具体操作是怎么样的没查到

作者: 张也行 时间: 2011-5-21 09:40

回复丁子的帖子7 l$ h' t$ a' f+ G$ X- h1 S0 \

你要是有限传代的正常细胞的话老化是一个正常现象，与其想除去不好的细胞还不如找一些好的细胞来做。你在除去不好的细胞的时候，那些好的细胞也早被你折腾死了。

作者: 丁子 时间: 2011-5-21 21:40

回复张也行的帖子" A8 G+ k+ P! r/ f, \
- R- Q0 ?" X) [% j$ M6 ]; q+ F
哦，好的

作者: 丁子 时间: 2011-5-21 21:44

回复 yangpan521 的帖子( ~0 b1 w% h$ H) z" v& G8 H. ?$ H
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恩，看来我需要做更多的了解才能提出问题了，谢谢

作者: 丁子 时间: 2011-5-21 21:45

回复 lifeida 的帖子

这个看起来有点麻烦了，我试试看

作者: genedu 时间: 2011-5-22 14:37

对于你提出的是贴壁克隆，最简单的方法就是再挑取一次，再传代即可；如果是不好的克隆比较少，那就直接把不好的克隆挑取出来，扔掉。剩下的继续传代

作者: 肉丁 时间: 2011-5-22 15:22

贴壁细胞状态不好时，贴壁并不紧，状态好的细胞贴壁会比较牢，个人建议可以采取轻吹的方法，当然这个力度要掌握好，如果怕浪费细胞，可以吹下的细胞再次进行低速离心，重新打回原瓶或在新瓶中培养，可以试一试

作者: genedu 时间: 2011-5-23 09:57

回复肉丁的帖子

您说的这种情况下，你可以试试胶原酶，控制一下消化时间，就可以使两种不同贴壁程度的克隆分离开来

作者: 和泽村 时间: 2011-5-23 11:17

首先将细胞贴壁培养，培养一段时间后，就同大家说的一样，进行换液培养，将未贴壁的死细胞和旧培养液一起倒掉，加入新鲜培养基就可以了。细胞形态不好，可能是本身细胞就有问题，个体差异性；外部因素的话，培养箱的设定是否符合培养的条件，如温度、湿度、浓度；培养箱的水要及时更换及添加，并定期消毒。还有就是培养液的问题，是否过期，是否污染了，最好用现配的培养液去培养细胞。如果你想去掉不好（比如细胞老化，生长不好）的这部分细胞，留下状态比较好的细胞继续培养或传代，你可以先换液，然后离心，最后分管，再镜下观察，留存形态较好的细胞。

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