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标题:
关于细胞培养
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作者:
丁子
时间:
2011-5-20 00:54
标题:
关于细胞培养
本帖最后由 丁子 于 2011-5-20 00:55 编辑
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在细胞培养的过程中，细胞的状态开始变得不好，想去掉不好（比如细胞老化，生长不好）的这部分细胞，留下状态比较好的细胞继续培养或传代，请问大家遇到有过这种情况吗？想请教大家又是怎么做的呢
作者:
pauldong
时间:
2011-5-20 04:45
如果你养的是贴壁生长的细胞就很简单，换液，将未贴壁的死细胞和旧培养液一起倒掉，加入新鲜培养基就可以了，如果是悬浮生长细胞，就麻烦点了，也可以通过换液去除，离心洗涤，离心力要掌握好
作者:
xiangchou812
时间:
2011-5-20 09:36
如pauldong所言，贴壁生长的细胞通过换液即可。另外，生长状态好的细胞贴壁应该也要快点吧，差速贴壁也应该可以尝试一下。
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悬浮生长的细胞，就得通过离心了
作者:
SCNT
时间:
2011-5-20 11:13
通过换液可以将死亡或质量比较差的细胞驱除
作者:
dulaiyouyu
时间:
2011-5-20 13:02
贴壁细胞直接去液，PBS漂洗之后换新培养基就可以。
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悬浮细胞，如果很难掌握离心速率的话，建议可以摇晃或者吹打细胞，静置个几分钟，一般死细胞密度较低，不容易沉降。
7 O: N1 P* s. B( Y6 k
小心吸去即可。
作者:
丁子
时间:
2011-5-20 14:10
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pauldong
的帖子
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是贴壁细胞，但是生长不好的这部分也是贴壁的，我说的生长不好是指细胞的形态不及一起那么好，有老化的迹象，这种情况下，只想保留生长状态好的部分，有什么建议？谢谢
作者:
丁子
时间:
2011-5-20 14:11
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xiangchou812
的帖子
( D1 v: j/ e0 D
2 e6 [& z/ C, j5 Z+ q/ n! ~* M
谢谢
作者:
丁子
时间:
2011-5-20 14:14
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xiangchou812
的帖子
9 Z2 ~7 v( S0 J6 R' N D+ E# T" l7 @
% [7 [2 ~9 V- [" Y5 S
谢谢
作者:
zhusealin
时间:
2011-5-20 15:07
有限稀释法亚克隆
作者:
细胞海洋
时间:
2011-5-20 15:31
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zhusealin
的帖子
# H7 B' n8 B G7 O4 M4 C3 g D2 a3 {
4 Y2 a4 }9 }( C$ X8 `! f
能解释一下吗
作者:
yangpan521
时间:
2011-5-20 15:36
不知到你说的细胞不好是指那种情况，是长的慢
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不知道你指的细胞养不好是指那种情况，是长得慢？细胞成团生长？还是死细胞较多？建议说的明确点，最好传个图片
作者:
lifeida
时间:
2011-5-20 16:15
在倒置显微镜下，用mareker笔把不好的细胞打个圈标记好，然后拉跟针，在超净台内，体视显微镜下，把打圈标记的细胞戳起来，然后换液！
作者:
丁子
时间:
2011-5-20 21:36
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zhusealin
的帖子
6 H/ `& _$ m" o) @, W! i; R
6 b4 ?* A+ B0 s
能介绍一下具体步骤吗？
作者:
丁子
时间:
2011-5-20 21:41
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zhusealin
的帖子
/ J& S" ]: e- @; d
8 l6 ?# v# O3 ^) d3 J K
能介绍一下具体的步骤吗？网上也查到有这种做法，但是具体操作是怎么样的没查到
作者:
张也行
时间:
2011-5-21 09:40
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丁子
的帖子
1 A2 g/ S% u& t7 }$ D
; {3 T0 s# V, S% J' |' y
你要是有限传代的正常细胞的话老化是一个正常现象，与其想除去不好的细胞还不如找一些好的细胞来做。你在除去不好的细胞的时候，那些好的细胞也早被你折腾死了。
作者:
丁子
时间:
2011-5-21 21:40
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张也行
的帖子
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哦，好的
作者:
丁子
时间:
2011-5-21 21:44
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yangpan521
的帖子
/ g. J0 ]* N9 t" I ]
' T) j( F, L o( r( d+ }# a W
恩，看来我需要做更多的了解才能提出问题了，谢谢
作者:
丁子
时间:
2011-5-21 21:45
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lifeida
的帖子
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这个看起来有点麻烦了，我试试看
作者:
genedu
时间:
2011-5-22 14:37
对于你提出的是贴壁克隆，最简单的方法就是再挑取一次，再传代即可；如果是不好的克隆比较少，那就直接把不好的克隆挑取出来，扔掉。剩下的继续传代
作者:
肉丁
时间:
2011-5-22 15:22
贴壁细胞状态不好时，贴壁并不紧，状态好的细胞贴壁会比较牢，个人建议可以采取轻吹的方法，当然这个力度要掌握好，如果怕浪费细胞，可以吹下的细胞再次进行低速离心，重新打回原瓶或在新瓶中培养，可以试一试
作者:
genedu
时间:
2011-5-23 09:57
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肉丁
的帖子
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您说的这种情况下，你可以试试胶原酶，控制一下消化时间，就可以使两种不同贴壁程度的克隆分离开来
作者:
和泽村
时间:
2011-5-23 11:17
首先将细胞贴壁培养，培养一段时间后，就同大家说的一样，进行换液培养，将未贴壁的死细胞和旧培养液一起倒掉，加入新鲜培养基就可以了。细胞形态不好，可能是本身细胞就有问题，个体差异性；外部因素的话，培养箱的设定是否符合培养的条件，如温度、湿度、浓度；培养箱的水要及时更换及添加，并定期消毒。还有就是培养液的问题，是否过期，是否污染了，最好用现配的培养液去培养细胞。如果你想去掉不好（比如细胞老化，生长不好）的这部分细胞，留下状态比较好的细胞继续培养或传代，你可以先换液，然后离心，最后分管，再镜下观察，留存形态较好的细胞。
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