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标题: 关于细胞培养 [打印本页]

作者: 丁子    时间: 2011-5-20 00:54     标题: 关于细胞培养

本帖最后由 丁子 于 2011-5-20 00:55 编辑 , X& R" z7 x* v  V( c
: r: m  v+ e. f  x
在细胞培养的过程中,细胞的状态开始变得不好,想去掉不好(比如细胞老化,生长不好)的这部分细胞,留下状态比较好的细胞继续培养或传代,请问大家遇到有过这种情况吗?想请教大家又是怎么做的呢
作者: pauldong    时间: 2011-5-20 04:45

如果你养的是贴壁生长的细胞就很简单,换液,将未贴壁的死细胞和旧培养液一起倒掉,加入新鲜培养基就可以了,如果是悬浮生长细胞,就麻烦点了,也可以通过换液去除,离心洗涤,离心力要掌握好
作者: xiangchou812    时间: 2011-5-20 09:36

如pauldong所言,贴壁生长的细胞通过换液即可。另外,生长状态好的细胞贴壁应该也要快点吧,差速贴壁也应该可以尝试一下。
3 h8 E) a4 x! Z" A( N; W$ `; H) n+ }悬浮生长的细胞,就得通过离心了
作者: SCNT    时间: 2011-5-20 11:13

通过换液可以将死亡或质量比较差的细胞驱除
作者: dulaiyouyu    时间: 2011-5-20 13:02

贴壁细胞直接去液,PBS漂洗之后换新培养基就可以。$ g& S5 n4 t6 I  |: t. M* B  ]

' @. {5 q# m5 U  z悬浮细胞,如果很难掌握离心速率的话,建议可以摇晃或者吹打细胞,静置个几分钟,一般死细胞密度较低,不容易沉降。: [' ]1 c! u' G7 [8 {. |
小心吸去即可。
作者: 丁子    时间: 2011-5-20 14:10

回复 pauldong 的帖子, X0 [) s5 F5 z6 e1 k9 F

/ ~% l8 s+ l+ g: Q是贴壁细胞,但是生长不好的这部分也是贴壁的,我说的生长不好是指细胞的形态不及一起那么好,有老化的迹象,这种情况下,只想保留生长状态好的部分,有什么建议?谢谢
作者: 丁子    时间: 2011-5-20 14:11

回复 xiangchou812 的帖子
6 X' u7 V) L! ?
) O) o$ W- |, n3 G" Y谢谢
作者: 丁子    时间: 2011-5-20 14:14

回复 xiangchou812 的帖子6 D1 T3 I9 j& I/ ?2 k/ ?

0 K9 h9 H6 N0 l- S+ }+ M谢谢
作者: zhusealin    时间: 2011-5-20 15:07

有限稀释法亚克隆
作者: 细胞海洋    时间: 2011-5-20 15:31

回复 zhusealin 的帖子
% R$ `7 p  O1 B+ D  A% |" A* i
" D! b; j+ M, O- d能解释一下吗
作者: yangpan521    时间: 2011-5-20 15:36

不知到你说的细胞不好是指那种情况,是长的慢
4 z, [* h: b/ G! E
# k8 ~# S" K" H( f3 W$ W
) P& f; o0 ~; g8 S4 K6 U! H
. E5 w# _4 F. s4 S
- o* m, N4 ~. r! O5 t+ N, @, B4 G. ^+ B' Q3 e: ]( v- d4 t0 l6 L

9 ~) l+ `% G- ?) I5 S6 {9 P2 H5 f  H8 F" G$ x8 D5 I- f4 Z$ N
不知道你指的细胞养不好是指那种情况,是长得慢?细胞成团生长?还是死细胞较多?建议说的明确点,最好传个图片
作者: lifeida    时间: 2011-5-20 16:15

在倒置显微镜下,用mareker笔把不好的细胞打个圈标记好,然后拉跟针,在超净台内,体视显微镜下,把打圈标记的细胞戳起来,然后换液!
作者: 丁子    时间: 2011-5-20 21:36

回复 zhusealin 的帖子+ H6 Y( u) e7 i1 B, ~5 b! c+ O0 h, b
4 l% ~5 o& V0 {6 b7 p4 s) `! K
能介绍一下具体步骤吗?
作者: 丁子    时间: 2011-5-20 21:41

回复 zhusealin 的帖子  b' j% f) M6 \5 I6 X& O( `4 F* R

$ u) W$ r0 U, `7 [/ J能介绍一下具体的步骤吗?网上也查到有这种做法,但是具体操作是怎么样的没查到
作者: 张也行    时间: 2011-5-21 09:40

回复 丁子 的帖子7 l$ h' t$ a' f+ G$ X- h1 S0 \

1 {* f" Q9 {; H5 Z你要是有限传代的正常细胞的话老化是一个正常现象,与其想除去不好的细胞还不如找一些好的细胞来做。你在除去不好的细胞的时候,那些好的细胞也早被你折腾死了。
作者: 丁子    时间: 2011-5-21 21:40

回复 张也行 的帖子" A8 G+ k+ P! r/ f, \
- R- Q0 ?" X) [% j$ M6 ]; q+ F
哦,好的
作者: 丁子    时间: 2011-5-21 21:44

回复 yangpan521 的帖子( ~0 b1 w% h$ H) z" v& G8 H. ?$ H
: g) y! e7 k1 L* z
恩,看来我需要做更多的了解才能提出问题了,谢谢
作者: 丁子    时间: 2011-5-21 21:45

回复 lifeida 的帖子
7 f* ?1 ?3 _1 i; w
" P$ [, t2 U+ h9 Y) o这个看起来有点麻烦了,我试试看
作者: genedu    时间: 2011-5-22 14:37

对于你提出的是贴壁克隆,最简单的方法就是再挑取一次,再传代即可;如果是不好的克隆比较少,那就直接把不好的克隆挑取出来,扔掉。剩下的继续传代
作者: 肉丁    时间: 2011-5-22 15:22

贴壁细胞状态不好时,贴壁并不紧,状态好的细胞贴壁会比较牢,个人建议可以采取轻吹的方法,当然这个力度要掌握好,如果怕浪费细胞,可以吹下的细胞再次进行低速离心,重新打回原瓶或在新瓶中培养,可以试一试
作者: genedu    时间: 2011-5-23 09:57

回复 肉丁 的帖子
7 l) P: E8 d1 {
8 @# H; }, v; N' z您说的这种情况下,你可以试试胶原酶,控制一下消化时间,就可以使两种不同贴壁程度的克隆分离开来
作者: 和泽村    时间: 2011-5-23 11:17

首先将细胞贴壁培养,培养一段时间后,就同大家说的一样,进行换液培养,将未贴壁的死细胞和旧培养液一起倒掉,加入新鲜培养基就可以了。细胞形态不好,可能是本身细胞就有问题,个体差异性;外部因素的话,培养箱的设定是否符合培养的条件,如温度、湿度、浓度;培养箱的水要及时更换及添加,并定期消毒。还有就是培养液的问题,是否过期,是否污染了,最好用现配的培养液去培养细胞。如果你想去掉不好(比如细胞老化,生长不好)的这部分细胞,留下状态比较好的细胞继续培养或传代,你可以先换液,然后离心,最后分管,再镜下观察,留存形态较好的细胞。




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