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标题: 我的一个思路，请问这样行不行 [打印本页]

作者: 临床干细胞 时间: 2011-6-1 07:22 标题: 我的一个思路，请问这样行不行

想知道一个干细胞对某种疾病是不是有效果，打入干细胞入这种动物模型，如果有了效果，想知道效果是否来自于干细胞分化出来的新细胞，所以想了个办法. j k/ K4 G# q3 I; I" {- R
就是，动物模型的老鼠是母的，打入的干细胞来自于公鼠，打入干细胞之后，测新生细胞的染色体，如果是xy的，就说明是来自于干细胞，你说这样行吗？ 7 d7 ^0 l* _! ?6 h$ z& L' G5 ~

作者: bathpp2007 时间: 2011-6-1 08:20

直接标记打入的细胞就可以了

作者: shuixiao 时间: 2011-6-1 08:28

不用这么麻烦。y染色体上有一段特异的基因sry，直接用PCR检测组织或者细胞的基因组sry基因就行。如果阳性，说明移植成功，如果阴性，说明一直失败。

作者: aminhair 时间: 2011-6-1 08:40

可以的。这种技术已经在精原干细胞移植及鉴定中应用过了。

作者: yangpan521 时间: 2011-6-1 08:50

可以的，干细胞具有全能性，就是不移植到母鼠，移植到公鼠肾包膜下也会发育

作者: dilal 时间: 2011-6-1 09:21

这种技术在国外权威杂志上的干细胞移植研究中已经广泛应用了，专业术语是sex-mismatched cell transplantation。这种技术挺复杂的，国内开展的好像不太多。

作者: 大少爷 时间: 2011-6-1 10:01

可以

作者: 懵懂干细胞 时间: 2011-6-1 10:18

2011中科院Induction of functional hepatocyte-like cells from mouse fibroblasts b.pdf (1.37 MB) 5 @* U% \$ Z9 Q1 Y3 z2 J
这个思想很好，在很多文献中都有用这个方法的！+ a2 P' N) m9 g! b" x8 j8 e
我给你一篇看看！就是外源的细胞来源动物与受体动物是异性的！6 b" v, g$ |0 Q- U

附件: 2011中科院Induction of functional hepatocyte-like cells from mouse fibroblasts b.pdf (2011-6-1 10:18, 1.37 MB) / 下载次数 33
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=Mjc4NzB8ODYxZDUwOTd8MTc5MzQ3MTczM3ww

作者: grape 时间: 2011-6-1 10:37

本帖最后由 grape 于 2011-6-1 10:37 编辑 : M: [! R" ]6 [: P

思路还可以。
但输注的干细胞和体内新生细胞如何区分？
个人认为，性染色体改变不一定是受体自体产生的染色体稳定的遗传性改变，其改变与治疗效果无必然联系，仅是一种佐证，而不是确证。! ^- M7 Y8 R) z
一般要联合检测该干细胞特定表面抗原标志及相关基因在体内的表达；' L) ~ P; ?+ m& }8 F
也可以采用某些标记技术直接标记干细胞，观察受体内带有该标记的干细胞表达。( I) _$ ^' v. u2 ?0 d l
对于干细胞对疾病治疗效果的评价需要多项指标、长期监测。

作者: lidaifu001 时间: 2011-6-1 11:22

干细胞打入动物模型，其干细胞的归宿问题在干细胞领域争议是非常大的，你既然有这样的思路，你就可以按这个思路去做个试验看看，哪怕失败了也是一种经历。

作者: xiangchou812 时间: 2011-6-1 11:49

学习啦。不过，如果用绿色荧光蛋白或者是LacZ等标记，会不会更直观呢？

作者: 张也行 时间: 2011-6-1 21:40

本帖最后由张也行于 2011-6-1 21:40 编辑 / ]! |- c. s( X4 n5 d4 j- X
1 G( ~: H+ u7 V! ?3 P% j
也可以对注入的干细胞提前导入荧光蛋白等标记，这样就可以通过切片分析是不是你的干细胞发挥作用了。& m1 [& |! q1 c# [) d6 P

我有一点不太明白，把一只动物的细胞注入到另一只动物难道就没有免疫排斥吗？

作者: shqinzhu 时间: 2011-6-2 11:23

直接标记细胞比较好，因为如果是用XY来检测的话，做PCR检测结果不是很具有说服力。我觉得检测移植效果，要看移植进去的细胞是否达到目的地，还有就是是否具有活性。

作者: bin 时间: 2011-6-2 18:31

似乎不错，用Y染色体上特殊DNA片段作为DNA探针做原位杂交应该可以确定移植干细胞的位置。

作者: 临床干细胞 时间: 2011-6-2 19:11

grape 发表于 2011-6-1 10:37 ! c; Q7 Q) @( B) \2 ?
思路还可以。
; }6 l; d+ n# h% s- W6 N但输注的干细胞和体内新生细胞如何区分？
6 O2 k) L, O& r# c: H/ A* l7 B个人认为，性染色体改变不一定是受体自体产生的染 ...

新生的细胞如果有Y染色体的话，就可以证明是由打入的干细胞分化而来的啊，难道我这样想不对吗

作者: 临床干细胞 时间: 2011-6-2 19:11

懵懂干细胞发表于 2011-6-1 10:18
2 d* |! u+ l0 W, @+ v! w: o这个思想很好，在很多文献中都有用这个方法的！! W, h" u2 P: ^6 M
我给你一篇看看！就是外源的细胞来源动物与受体动物是异 ...

非常感谢，我这就看一下

作者: st_oliver 时间: 2011-6-2 20:00

回复 bathpp2007 的帖子

请问你标记过么？是怎么标记的，用什么标记的？请教了！

作者: bin 时间: 2011-6-3 11:16

回复 st_oliver 的帖子: ~( p- Q( e0 j! U" D5 t" i) s

标记细胞可以用绿色荧光蛋白（GFP），可以选择转基因动物来提取细胞，当然也可以取正常动物的细胞，培养后转染GFP，但是自己转染的话GFP效率不高，而且不能稳定表达，大概4周后荧光几乎就消失了，转染对细胞本身就是一种伤害。所以如果要示踪的话，我劝你还是选转基因动物吧，很方便的，当然你的想法也是不错的，但是后期检测起来可能会很麻烦，不是每个实验室都可以做到的。

作者: st_oliver 时间: 2011-6-6 09:36

回复 bin 的帖子
- d; @* V& E7 I$ a# M
谢谢你的回复，用转基因动物当然最好，只是我所研究的是猪的iPS细胞，前期由于转基因猪的获得的也比较困难，也没有得到别人的细胞，现在要做后期的研究，标记只能选择其他方法了，有没有些比较好的，标记可靠、持久的方法介绍呢

作者: bin 时间: 2011-6-7 21:48

回复 st_oliver 的帖子. \9 m/ p. K# @# ^' i1 _, [# g
3 s/ ?! s8 X i" Y `4 u
听说用慢病毒转染GFP，然后可以筛选出稳定表达的阳性细胞，但是我没有做过，你或许可以试一试。

作者: kittybruce 时间: 2011-6-7 22:18

张也行发表于 2011-6-1 21:40
5 n; {. m: k1 x也可以对注入的干细胞提前导入荧光蛋白等标记，这样就可以通过切片分析是不是你的干细胞发挥作用了。
/ E% m7 ~$ s$ I$ g- [
& h2 M7 M! X; ^9 E: A3 V$ X我 ...

0 q' M, C: a2 ]* K6 n5 D
"我有一点不太明白，把一只动物的细胞注入到另一只动物难道就没有免疫排斥吗？"$ |1 B+ }: ~# K: [# i

这个问题提得很好，其实更好的提法是在异性动物间移植会不会有排斥反应，印象中有报道即使在近交系内，性别差异也可能介由Minor histocompatibility antigen激活排斥反应。- h& }) k! i3 s* A/ U. s, M2 e

楼主的想法是可行的，约10年前心脏移植领域就通过这种思路发现供体心脏在体内的细胞嵌合现象，用FISH在女性供体心脏中检测到来源于男性受体的具有Y染色体的细胞。干细胞体内移植研究领域标记方法颇多，但相比之下原位杂交特异性还是较强的，只是需要做好对照防止假阴性。

作者: dxb1985 时间: 2011-6-9 10:31

回复临床干细胞的帖子* l, ]' k5 u) B0 M( `& X. i
9 ?* t( s+ _: C6 e/ F7 V
为什么不用细胞膜标记物（如pkh26等），能跟踪细胞是否定位到损伤部位，还比较方便，做个免疫组化就行了。其实还可以纳米材料标记，给你一篇文章，是做人的神经干细胞治疗的。5 ?$ s1 b" P5 ]/ s n* v

附件: Tracking neural stem cells in patients with brain trauma.pdf (2011-6-9 10:31, 568.56 KB) / 下载次数 3
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MjgzMjB8NWU5ZWJmY2V8MTc5MzQ3MTczM3ww

作者: 临床干细胞 时间: 2011-6-9 11:01

dxb1985 发表于 2011-6-9 10:31
, P7 A7 c4 S! B M回复临床干细胞的帖子
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为什么不用细胞膜标记物（如pkh26等），能跟踪细胞是否定位到损伤部位，还比较方便 ...

( V' I" u1 [" ^' B4 f
太感谢了

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