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标题: MSC成脂成骨诱导图片 [打印本页]
作者: Learner    时间: 2011-6-2 08:48     标题: MSC成脂成骨诱导图片

这是我昨天做的检测，我的成脂检测错过了最佳检测时机凑合看吧！
作者: luoziwei    时间: 2011-6-2 09:22

很好的结果！建议分享一下染色方法，比如固定时间，染色时间等等
( o+ x3 I# F  t6 }+ g5 K
作者: luoziwei    时间: 2011-6-2 09:25

请问楼主，曝光时间怎么加上去的？
作者: 皮搋子    时间: 2011-6-2 09:31

求诱导液配方。
作者: stream    时间: 2011-6-2 10:09

油红染色那个怎么不见有干细胞？
作者: 胡问成    时间: 2011-6-3 02:54

回复 Learner 的帖子. q/ d# s8 Z# V; G, f( m

7 K" i' O' e- V成脂的还可以，成骨分化的不太好
作者: lizhiyong    时间: 2011-6-3 20:06

成脂那张，时间把握的很好。。。很不错。。
作者: Learner    时间: 2011-6-6 15:12

回复 luoziwei 的帖子
% @: ~; h. r9 o) j  U: r- A
" R6 |& d, r" @/ ]9 g. Y是olympus照相机软件上带的功能。
作者: Learner    时间: 2011-6-6 15:17

回复 皮搋子 的帖子. o' _0 E+ r8 y& V! D( x9 P
- H, E$ m! o1 H5 T0 I2 x
不好意思回复晚了，这个周末去了四川旅游才回来。
0 R$ H  \" u1 A9 B) Q) X6 p# z& S6 i  p/ E' T
OSTEOGENIC MEDIUM
( y0 M* p; G0 x- K4 \/ ], r  j•        DMEM plain, high glucose, with L-glutamine 0 t4 `, R. R9 x: r& q& ~
•        1% Non essential amino-acids; some people don’t use it
9 v2 {% K6 _# {0 l: D) s•        1% Pen-Strep
7 y! g- B! z8 N•        10% FBS
( M$ w8 ]; L! w•        100 nM Dexamethasone
6 C- \  }, `- f$ O•        10  mMb-Glycerol phosphate9 u/ y- `# f) m) o
•        0.05 mM Ascorbic acid
$ b, r+ v! }7 }; i: ?' @
- I, m/ ?, v, R6 p2 l8 z5 aADIPOGENIC MEDIUM
- F  ~! h# B3 ~* i- k•        DMEM plain, high glucose, with L-glutamine ; [3 x& p" @! `. Y) a7 L; b
•        0.1 mM Non essential amino-acids% a7 E, T  l4 y4 ?; a3 Z
•        1% Pen-Strep  `0 l# x7 ?8 X" e( H
•        10% FBS
6 t; ]3 b& H/ s9 \# m9 y* C$ ^•         50 uMIndometacin, 1000x stock solution (100 µL stock/100 mL media)
% E* O3 I! d, o& m1 b: B•         0.5 mM IBMX, 100x stock solution (1 mL/100 mL media)4 F; B# H+ Q) y* Q! ~
•        1uM Dexamethasone, (393 µL stock/100 mL media)
; z. A- H. q7 {* t2 I2 Q•        5 ug/mLinsulin (50 µL stock/100 mL media)! U  e% O  p: z0 g3 O

9 n! R# ~+ f* Z+ I' ?CHONDROGENIC MEDIUM
+ u, |3 L, W) O7 A& ~+ z# T. {•        DMEM plain, high glucose, with L-glutamine
" u  d! y! I! r•        1% Non essential amino-acids: B7 c4 u6 f( D& b
•        1% Pen-Strep or Pen-Strep-Fungizone
" Z) N" }6 }3 c% r$ m•        6.25 µg/mL Insulin, Transferrin, Selenium (ITS + 1) (1 mL stock/100 mL media): m4 Q! R& i( o2 {% A/ y3 ]
•        100 nM Dexamethasone (10 µL stock/100 mL media)
# c: {$ R/ h. ]: c•        10 ng/mL TGF-b1 (1 mL stock/100 mL media)
9 m: c+ R: [( @: v% o$ F* P- X/ L
作者: 皮搋子    时间: 2011-6-6 18:22

100 nM Dexamethasone? 这个100NM是啥单位？
作者: Learner    时间: 2011-6-6 18:57

回复 皮搋子 的帖子
/ D4 o6 F, I$ b% I+ G# k! y$ ~$ S) }* k  q  u" t
1uM=1000nM
作者: Learner    时间: 2011-6-6 19:00

回复 stream 的帖子$ Q) h2 y* D9 G* ^

* G) t, T7 t/ B, R. W  e) Q干细胞大部分都分化了，有些未分化的也老化了，我用的细胞不是经过流式细胞仪筛选的，有些本身就不是干细胞。
作者: lkzjyx    时间: 2011-6-6 22:16

请问楼主是做的哪种动物的MSC呢？用的什么方法分离和培养的，谢谢   
: P" w# j( |' U# e$ O2 l9 @* P1 s: v因为我也在做这个方面的研究  我做的是犬的BMSC 想跟你交流下
作者: Learner    时间: 2011-6-7 08:31

本帖最后由 Learner 于 2011-6-7 08:34 编辑
( {' f1 V. a; F' `( J7 g7 b$ `+ S' D2 q5 j/ s! Q
回复 luoziwei 的帖子8 R( y9 \; u7 L4 j! s1 D
3 O4 L+ ]. G; ^0 e
很抱歉回复不及时，这几天出门了。
* r% R; ^2 }& y" u4 z2 q+ G! F8 C( I下面是我的染色方法：& G7 _. m% {+ ]& r. i8 u
固定前细胞吸去培养基用PBS洗一到二次。, M7 n7 O' B% q2 @1 J! O  [: z
Alizarin Red S staining:
& _- ]# o+ w$ A' b1. 4%PFA fixation at RT for 30min.
3 P6 @: Y8 I: K& t2.Then wash wish PBS twice.7 }+ `5 d3 u5 R8 x$ I( x
3. Add 1ml of 2% alizarin red water solution (pH4.1-4.3 use 1% NH4OH adjust pH) stain RT for 20min with gentle shaking on a rocker.
3 }9 ~. a3 P% q5 x0 Q' f5 w4.Then wash with PBS for 4 times with gentle shaking. The washing time could be up to 1 hour.8 V) |" Q9 T6 g" M  y, D$ {' M' [
5.Leave some PBS in the well and look under microscope.
作者: 皮搋子    时间: 2011-6-7 10:43

多少毫升中加1uM？
作者: Learner    时间: 2011-6-7 12:03

回复 皮搋子 的帖子
  ]) `4 J2 N9 F' q
& B3 J2 y( l. Q1uM=1umol/L 这要取决于你在诱导中的终体积。2 \1 l2 u2 C3 e2 v0 P+ Y( a. ]/ g
1M=1mol/L
作者: Learner    时间: 2011-6-7 12:17

回复 luoziwei 的帖子% g3 S9 o2 u' v! p% f* E
6 e0 `5 e0 G+ A; _
关于油红O染色步骤：3 P* m( P# `9 j6 d
1。 Cell fixation with 4%PFA RT for 30min.
9 W4 k* s! A4 q# q/ E% j) `2.   Remove PFA and wash cell with PBS once.5 k, q7 A, n8 U9 \) Q* `8 C, m
3. Then wash cell with 60% isopropanol for 30 min on a shaker.1 }3 u( T- z% l" h
4. Remove 60% isopropanol and add working oil red O solution stain for 30 min on a shaker.
; @& T0 d4 R3 h, p  {4 B5. After 30min remove oil red O stain immediately and wash with PBS for 4 times." Q) T3 h3 B: T  j: S3 r4 P6 ?
6. Leave some PBS in the well and take picture.
8 E8 p) i2 J4 dThe working oil red solution should be made fresh from the stock each time. 4 Y& v: }) U& u) j
Stock solution (175mg oil red O/50ml 100% isopropanol) could store for up to one year.
, {4 O. h! k  ^4 m. ^Working solution: dilute the oil red O stock solution with PBS(6ml oil red O stock+4ml PBS) filter with filter paper or 0.45um filter unit.
作者: Learner    时间: 2011-6-7 19:25

回复 lkzjyx 的帖子% H0 @; s2 s$ k5 h8 i
: U- B6 m* H+ I' a( n
human bone marrow MSC
作者: hxf_86    时间: 2011-6-7 19:31

这个图片很好啊~学习了~
作者: luoziwei    时间: 2011-6-8 15:18

回复 Learner 的帖子) B7 q0 u. I( x" I$ e3 G& C* M
' i, t6 \1 R+ X3 f5 n
有两个小问题想请教一下，你是直接在孔板里诱导染色的？还是把细胞种在玻片上然后取出玻片进行染色拍照的？另外一个问题是，关于油红0染色，用60%的异丙醇洗涤是为什么呢？
作者: Learner    时间: 2011-6-8 16:17

回复 luoziwei 的帖子& `& ^! Y4 o: t; J: c# \$ Y

/ @8 E! I* R1 e, Y% L' Z3 b4 G我是直接在孔板里染色，因为我们实验室是倒置显微镜所以直接就能拍照。你也可以做爬片都无所谓。我个人理解用60%的异丙醇洗涤，是先给细胞一个溶剂平衡的环境。因为油红O的工作浓度就是60%的异丙醇溶液（6ml储存液+4mlPBS).
作者: luoziwei    时间: 2011-6-9 08:49

多谢啊，直接在孔板里还能拍的那么好，真是不容易。
作者: stefan    时间: 2011-6-9 18:44

楼主的图片真的是做的不错啊！学习了！我也正做骨髓间充质干细胞诱导方面的研究，但是实验结果不是很理想啊！楼主能不能分享一下具体的实验设计步骤啊！比如说：是细胞完全融合后开始诱导还是融合后的第几天开始诱导？还有就是染色时间的确定，什么时间染色比较好？楼主染色的步骤等？希望楼主能赐教？谢谢！！
作者: 生物化学zy    时间: 2011-6-9 22:01

回复 皮搋子 的帖子
8 ^' V; b+ ^% g; z& O" t0 ?! W$ i  j, i1 s* Q) m
就是nmol/L
作者: 肉丁    时间: 2011-6-11 22:25

成脂的这张很让人羡慕啊，真不错
作者: yangjianhong    时间: 2011-6-11 22:34

很好的结果，谢谢分享！
作者: Learner    时间: 2011-6-12 18:38

回复 stefan 的帖子, a; G: s& s6 V- G' S2 D. {) F! R

- M7 Q( O" ]  i3 T) j; E! j固定染色方法已经在回复luoziwei的帖子中详细介绍过了。成脂诱导建议细胞完全融合后诱导或80%以上。成骨诱导在诱导同时细胞还在增殖所以可以在细胞70-80%融合时开始诱导。诱导最好在细胞接种孔板中两天内进行。
作者: bianhuimou    时间: 2011-6-12 19:52

您在诱导分化未染色的图片有吗？想和您学习一下( n/ ^( M0 U1 Z/ G& C1 z# H! @
作者: Learner    时间: 2011-6-13 08:55

回复 bianhuimou 的帖子
$ Z, ~, X; Q, t0 q& [8 `5 z
+ y: _" b7 y. o' C7 o2 w! b这是染色前的照片
作者: Learner    时间: 2011-6-13 08:58

回复 bianhuimou 的帖子, T" ?: u3 A. L& R* r
2 U! }1 `* J6 Z6 d6 V/ u: O4 H& E
成脂诱导染色前
作者: bianhuimou    时间: 2011-6-20 22:33

本帖最后由 bianhuimou 于 2011-6-20 22:39 编辑 9 {( q5 l2 V, d8 r1 W) f" D
! E3 I( ]7 @- r( ^1 \( B8 k0 j
好漂亮的图片。谢谢您的分享。我最近也在做诱导分化快2周了，成脂诱导未染色的细胞形态有些变圆变扁了，可是还是没有看到脂滴呢，真急人。
作者: bianhuimou    时间: 2011-6-20 22:36

您的诱导分化培养基配方和步骤能分享吗？
作者: bianhuimou    时间: 2011-6-20 22:39

您的诱导分化培养基配方和步骤能分享吗？
作者: bianhuimou    时间: 2011-6-23 20:37

回复 Learner 的帖子; A2 u% u* K# [3 S5 z

1 E  F$ }6 K5 L. ~. M您好，我的成脂诱导已经2周了，可还是没有见到脂滴呢，您指点下吧
作者: Learner    时间: 2011-6-27 08:11

回复 bianhuimou 的帖子
/ U* @1 y& |1 J- O( O) R. P! q7 x4 z1 _
诱导培养基的配方是什么？6 @* K8 v7 u- p
细胞用的是第几代的？
作者: Learner    时间: 2011-6-27 08:14

回复 bianhuimou 的帖子
, `1 F/ ?+ A" d2 R  {; Z
- k9 Z! r& M) m这是我的配方：  J7 y% T/ h% Q9 s
ADIPOGENIC MEDIUM: {. ?: h# U' w5 V1 c1 G
•        DMEM plain, high glucose, with L-glutamine 8 C- r" b& @& d$ |" C  [
•        1% Pen-Strep, `7 A1 G( U5 B! O- ~
•        10% FBS
1 [1 [0 }/ z3 E- r2 A2 ]4 q•         50 uMIndometacin, 1000x stock solution (100 µL stock/100 mL media)) y  _  J+ s1 w. a) J/ \
•         0.5 mM Isobutyl Xanthine (IBX), 100x stock solution (1 mL/100 mL media)
5 z( e$ N) H7 D6 E) v% B•         1uM Dexamethasone, (393 µL stock/100 mL media)
$ R! N: g% H; D2 |•        5 ug/mLinsulin (50 µL stock/100 mL media)
: p! C9 H) x/ ]/ i
作者: 临床干细胞    时间: 2011-6-28 05:24

Learner 发表于 2011-6-6 15:17
# _1 Y( E3 F  S4 @1 s+ h; `6 t回复 皮搋子 的帖子8 ^2 O9 r. {5 R& M4 `9 W
. l5 n+ ~' \  q7 s2 f
不好意思回复晚了，这个周末去了四川旅游才回来。
9 ~$ t! |  W: w4 x
请问你那个ITS是配的还是买的，(ITS + 1) 里的+ 1是什么意思
作者: Learner    时间: 2011-6-28 08:59

回复 临床干细胞 的帖子- {4 [" e% |/ x6 x; C+ C  Y

. [: b. D6 \1 H4 JITS 是买的成品液体，配好的.买的是Cellgro  的10ml （可以稀释成1L的工作浓度）大约340元左右。（I   Insulin， T transferrin, S sodium Selenite )+1是表示一价的阳离子。
; X$ R" [! {+ K: K$ C1 \我没有QQ号，你要需要可以给我发email：he_guiyuan@hotmail.com
作者: susansoffen    时间: 2011-7-25 09:25

回复 Learner 的帖子" |) X$ ?- a' U$ I  k0 Q  ?

2 J' n+ G6 g  ]& u& ]你好,请问一下,我昨天第一次诱导,刚加进成脂诱导液2-3个小时,细胞就出现裂解\破碎\变形,是什么原因呢?你的细胞在诱导过程中一直保持原样吗?我用的P3代细胞,大约3*10的4次方每孔种在24孔板,接种后2天加的诱导液.请高手赐教!
作者: Learner    时间: 2011-7-25 16:20

回复 susansoffen 的帖子
# e  u4 E. [6 ]/ }) ?: e8 B% b- G3 a/ I" E1 `+ |
检查每种试剂的使用浓度是否正确，溶液的配制都是用的什么溶剂？是否对细胞有毒害？再就是看溶剂有没有用错，误加入了什么东西。实在想不出来细胞为什么会裂解。
作者: susansoffen    时间: 2011-7-26 06:05

回复 Learner 的帖子+ S2 X7 }2 T4 o* u% C0 h6 a
* V/ l! Q: d, X$ n8 P4 e2 O
作者: susansoffen    时间: 2011-7-26 06:22

回复 Learner 的帖子$ s' ^) @. k& H0 f

; @1 r1 U6 Q* O4 p5 o6 L你好，请问怎么传图片到帖子里？为什么批量上传后图片就不见了？
作者: susansoffen    时间: 2011-7-26 06:26

回复 Learner 的帖子1 B: S: K7 Q( w7 g6 C$ Y5 s

4 t+ p9 Z/ B! i) [6 u1 N你好，昨天本来我也觉得是诱导液的问题，可是昨天下午给另外几个板的细胞换了个液，就是普通的完全培养液，并没加诱导液，细胞也出现了相同的变化，实在不知道是怎么回事了，请高手赐教
作者: Learner    时间: 2011-7-26 09:07

回复 susansoffen 的帖子  J9 D4 ?1 }$ @! \9 F

+ r0 V5 X! A: L6 I% Z那就弃掉所有的培养液，重新配。
作者: Learner    时间: 2011-7-26 09:08

回复 susansoffen 的帖子/ W& P/ r: C$ {) v; x1 T% Q/ P

; O$ Y, m- U4 `4 @, z( T# p; J7 K在高级模式里面上传照片，可能对照片文件大小有要求。不能一次传太多吧！
作者: 细胞海洋    时间: 2011-7-26 10:24

回复 susansoffen 的帖子7 u  d6 D/ y% ~6 x: l2 a% Z' M

& J6 t; k" h* I: [图片太大了 单个图片不要大于1000kb
作者: 临床干细胞    时间: 2011-7-30 00:41

Learner 发表于 2011-6-6 15:17
7 a/ M! z& Z# u2 C8 x回复 皮搋子 的帖子. @  \+ G! i( i* [6 f5 E
0 I3 j2 f! B6 v" A
不好意思回复晚了，这个周末去了四川旅游才回来。
2 J3 r, |9 M( _6 w
请问你显微镜是多少倍拍的
作者: Learner    时间: 2011-8-2 16:51

回复 临床干细胞 的帖子
9 s+ [/ f: I2 s! u) e3 s
* i8 A/ P3 Q+ h& w& W20um的是40×物镜，200um的是4×物镜，目镜的放大倍数我不知道有可能是10
作者: menghy    时间: 2011-8-3 14:39

成脂分化的很漂亮，谢谢分享！学习中！
作者: menghy    时间: 2011-8-3 14:39

成脂分化的很漂亮，谢谢分享！学习中！
作者: 都市青蛙    时间: 2011-8-23 20:49

回复 皮搋子 的帖子
* x% ?( `3 l+ R" m8 E) L& E- w$ H$ r" t1 B8 u
应该是nM吧，意思是nmol/L，就是纳摩尔每升
作者: wanglijing2011    时间: 2011-8-24 16:30

才看到MSC的诱导染色，觉得很不错，茜素红S染色基本所有的细胞都染上颜色了，不知道你做的是人的MSC还是其它物种的MSC，; N$ `1 c* c+ F# R
. }8 D* N# u* g4 `; ?! D
我现在也在做小鼠的MSC，不知道什么原因，每批细胞的形态都不一致，向成骨细胞诱导的效率很低，只有很少的结节，细胞的形态也很奇怪，全部铺展开来，没有一点立体感，培养条件跟你的是一致的，但是效果却差很远。
! m! B; W6 R- E- Y4 h4 E
  H6 I3 |" t$ _看到你的帖子，学习一下。
作者: 细胞海洋    时间: 2011-8-25 10:05

回复 wanglijing2011 的帖子
1 p' @& i/ P) w0 {2 R
' g3 W' H1 l8 F# Q6 q建议你发新帖 这样更容易被大家看到
作者: lvmaoshiwo    时间: 2012-2-21 15:08

回复 luoziwei 的帖子) ~7 w9 v3 h9 n& ]4 q

7 F3 a% J7 g& Z7 ~6 Y为什么诱导后有脂滴形成 但是检测分化标记基因没有明显的上调？求助~~
作者: luoziwei    时间: 2012-2-22 09:18

如果你只 需要检测MSC的分化能力，脂肪分化只要能染出油滴即可，个人觉得没必要再做分化基因检测。如果你还想做脂肪分化的信号分子机制的话，就要检测分化基因的表达情况了。基因表达跟细胞状态有关的，也有可能你操作误差等等，既然能染出油滴，不可能检测不到PPAR，aP2这些基因表达的。下次你设一个阳性对照
作者: luoziwei    时间: 2012-2-22 09:21

回复 lvmaoshiwo 的帖子3 q8 ~% f+ C4 \/ i" R3 t
% p: G( O( [6 U% Y9 e# H7 L' B
如果你只 需要检测MSC的分化能力，脂肪分化只要能染出油滴即可，个人觉得没必要再做分化基因检测。如果你还想做脂肪分化的信号分子机制的话，就要检测分化基因的表达情况了。基因表达跟细胞状态有关的，也有可能你操作误差等等，既然能染出油滴，不可能检测不到PPAR，aP2这些基因表达的。下次你设一个阳性对照
作者: lvmaoshiwo    时间: 2012-2-28 16:58

回复 luoziwei 的帖子
3 p. ^+ x/ x) k5 w2 P% W) [( H
我是要做一些信号通路的，所以不得不检测标记基因，诱导用的间充质流式鉴定挺纯的，诱导后6天左右细胞就崩解 象碎片一样的，不知道怎么回事，细胞没有死的话，检测标记基因还是不行。
作者: lvmaoshiwo    时间: 2012-2-28 17:01

回复 Learner 的帖子+ u! z, i* C; ]2 [& y- d. v
/ u! C( V8 {/ i! Y
问楼主细胞是什么物种的 自己取还是买的呢？我们自己取的小鼠MSC细胞形态一直不太好，肥大的说
作者: owenlion    时间: 2012-2-28 22:22

应该学习下
作者: luoziwei    时间: 2012-2-29 09:35

回复 lvmaoshiwo 的帖子+ ?! d" W2 @3 R  w

9 R% _7 `! M- Z- Z7 n碎片一样？是不是你的诱导液某个成分加多了，溶解那些化合物的溶剂好像对细胞都有毒的，比如甲醇，DMSO等等
作者: jindong1006    时间: 2012-2-29 09:46

学习一下。
作者: open1230    时间: 2012-2-29 11:00

谢谢楼主！
作者: Learner    时间: 2012-3-2 08:05

回复 lvmaoshiwo 的帖子, S: [& G+ G& {! t5 r" Y1 e

" T3 Q: n2 r) u# M. F我们用的是人源的，是别的实验室赠送的，具体不方便透露。
作者: 不苦的药    时间: 2012-3-3 11:48

我想请问楼主，你用的是茜素红还是茜素红S 染色,用氢氧化钠调PH行吗
作者: lvmaoshiwo    时间: 2012-3-5 14:50

回复 luoziwei 的帖子
! ^9 |) k" E& r. m4 p# h7 z
8 ?6 |6 G( a7 y+ d/ {- d& A: O8 N1 Q配诱导培养基好像有个东西是用DMSO溶的，我的邮箱linxiao@microbialab.net  希望能想你求教。
作者: luoziwei    时间: 2012-3-5 18:49

回复 lvmaoshiwo 的帖子) u2 c  ?& P  A. t2 r; R- E

7 |9 G+ L" G& Q3 p+ R没事，有问题就直接说嘛，大家讨论才有进步。
作者: Learner    时间: 2012-3-14 08:26

回复 不苦的药 的帖子# }+ W: |: `  q" K0 g
  c$ G) a) |1 i2 ]. X
茜素红S，我想最好用操作步骤中建议的试剂不要随意更换，如果想尝试可以配置一小部分溶液试一下。茜素红S之所以能使ca+显色就是与阳离子发生螯合反应，不知道和Na+是否会形成沉淀。
作者: hhxxattxs123    时间: 2012-7-8 10:18

回复 皮搋子 的帖子+ l6 d2 r$ }' @' W" R7 {

( r8 ?1 h+ _+ ?N是等于1乘10的负9次方，100n是10的七次方,M 是mol/L，100nM是1*10^7mol/L
作者: hhxxattxs123    时间: 2012-7-9 15:32

回复 Learner 的帖子
3 x; r( \: l( L# e4 A/ L( c
  |( U5 t) }/ J' N* q( b# z" Q我的茜素红染色是褐色的，是不是钙结节呢，
作者: jiefengbing    时间: 2012-7-9 15:51

请问茜素红对照的结果是怎样的？成脂的那张细胞太少。
作者: yaolei1984    时间: 2012-7-11 14:14

我觉得成骨还可以 啊
作者: dongxin    时间: 2012-7-11 14:49

本帖最后由 dongxin 于 2012-7-11 14:50 编辑
' A" g! d& H: c; T% G" E( \
. _- c" c8 h0 i3 Y- V) W2 g. c回复 皮搋子 的帖子
0 v- o  x' X; ?5 q' O" S- ^. r/ D5 h* J, S' F
应该是 纳摩尔/L 的意思吧
作者: 小猪快跑    时间: 2012-7-12 12:10

这是人的MSC吗？
作者: luckywen    时间: 2012-7-14 21:24

本帖最后由 luckywen 于 2012-7-14 21:29 编辑
* y" E" `! t+ @% f  _
/ c( i6 ]* S9 [; `1 t" Z感谢楼主分享！我想请教您几个诱导成骨、成脂及成软骨的问题：" }& \! |% _7 F  e
在细胞接种第2天使用诱导培养基时，是半量换液还是全量？
% i/ Z6 L3 M2 b( x诱导过程中几天换液一次，如何换液？
0 ?) e1 Y* ?( _2 Q诱导及染色鉴定过程中有哪些注意事项？) N* _5 c6 o. y
  Y. Y. w! [2 J+ R
不胜感激！
作者: luckywen    时间: 2012-7-14 22:32

回复 luoziwei 的帖子1 ~; r$ G6 p! |( M
' ?0 {% a  }& r2 ~, a
用60%的异丙醇，是用来脱色的，目的是除去多余的染料，使染色效果更好。
作者: lily1987    时间: 2012-7-16 10:54

回复 Learner 的帖子' \- B, Y3 A$ F1 D
) Z" T  O+ @. `" X
请问你的诱导试剂是怎么溶解的？我直接加到培养基中最后都没有完全溶解，谢谢
作者: 如来的观音    时间: 2012-7-16 11:23

诸如50 µL stock/100 mL media，是不是代表50micro;L储存液 加入100ml培养基中？那么micro;L 是什么意思？谢谢
作者: lily1987    时间: 2012-7-16 15:38

回复 如来的观音 的帖子
- w1 e+ c$ j( q; ^6 H
7 ~% m0 }8 N8 C4 C) W' v$ Zμl 吧
作者: 如来的观音    时间: 2012-7-30 20:31

Learner 发表于 2011-6-6 15:17
/ R+ J, \; V; o回复 皮搋子 的帖子
1 T1 t4 ^6 S8 f" o/ r
2 p* Q( O( e; p* F! P8 }/ Q( h不好意思回复晚了，这个周末去了四川旅游才回来。
: t5 e7 n8 h$ S) C
就看你回复了成骨和成脂后的茜素红染色（为什么不加做ALP染色呢）及油红O染色，那么你们有做过软骨胶原染色吗，有具体的染色方案吗？谢谢
作者: sijiefeifei    时间: 2012-9-20 14:15

回复 Learner 的帖子
: H2 e  Z# H  I7 ]4 y- D7 H2 a% ^# t. f& V2 w% V
楼主成骨染色的具体操作时间条件可以分享下吗
作者: sijiefeifei    时间: 2012-9-20 14:16

回复 Learner 的帖子
. J8 B3 O/ ~0 l8 |) P% y9 U8 |+ I1 e& S' R9 R+ \
还有，你的茜素红是自己配的吗～
作者: firstaider    时间: 2012-9-25 00:55

这个图片不错  学习了
作者: 如来的观音    时间: 2012-9-29 15:51

luckywen 发表于 2012-7-14 22:32 ! }$ }& r, N3 l. ~- B
回复 luoziwei 的帖子
# `' ?$ L6 J$ p: q7 K  e. r, {2 @5 g. g0 `0 k
用60%的异丙醇，是用来脱色的，目的是除去多余的染料，使染色效果更好。

  N( ^- }: J( w* h2 C4 I您说异丙醇是用来脱色的，可它是在染油红o之前就加进去的呀？
作者: tinybear    时间: 2012-9-29 18:05

回复 皮搋子 的帖子: A1 g; E0 G, F! I

( I  D! @" a1 g* r/ r% T% C8 L) u, Q: v纳摩？
作者: luckywen    时间: 2012-10-9 16:06

回复 如来的观音 的帖子
6 P4 z; c4 ^; C& X4 J$ `: o4 U6 J& d- X7 {0 W) l9 T
对不起，之前可能没太理解，可能是增加细胞通透性，或者染色前的固定作用吧。
作者: baby00000003    时间: 2014-9-23 21:26

我也在做MSC的成骨诱导，今天换液时加的过快了，把细胞层给吹起来了.......$ a4 H$ m5 p+ D1 s- \
请教楼主，可有什么方法能在诱导期间维持一定的细胞密度？
作者: 细胞海洋    时间: 2014-9-24 09:52

回复 baby00000003 的帖子
7 M! P% f' K7 O7 R, Y" y4 K  n5 H- j9 k/ c$ `
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作者: baby00000003    时间: 2014-9-24 12:44

回复 细胞海洋 的帖子0 V) H5 @$ m1 k* j5 V! q
) D3 o$ J# U+ s8 k  s! y
多谢提醒~



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