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标题: 关于慢病毒包装293T培养液 [打印本页]

作者: 李泽中 时间: 2011-6-18 14:08 标题: 关于慢病毒包装293T培养液

包装慢病毒时，由于293T细胞代谢非常快，培养液很快变为黄色，请问各位大虾，293T培养液中可以加HEPES吗?

作者: 干细胞狂想 时间: 2011-6-18 19:23

没什么问题吧，HEPES是为了随时调整培养液pH的，方便你每天观察，影响培养液的酸碱度，但是浓度掌握好，因为浓度过高对细胞有一定的毒作用，具体浓度你可以去查卖HEPES液公司的网页，他们有详细介绍

作者: hndxws 时间: 2011-6-18 21:18

我觉得不必在意这个，培养液变黄应该至少在24小时后，36或48小就收上清了，这段时间我觉得没什么影响，

作者: 大笨鸟 时间: 2011-6-19 09:38

个人认为没必要加，如果要避免液体变黄，有几种选择：1，在包毒12-16h时换液，此时由于细胞密度过大，能够转进细胞的已经进了，进不去的也很难再进去；2，在包毒24h时补液至培养皿/瓶最大容量即可。方法2的缺点在于包毒48h后不易于荧光观察，需在收毒后观察。病毒上清需浓缩后使用，滴度和方法1的差不多。祝好

作者: ningtinglu 时间: 2011-6-20 17:34

个人感觉没必要，你可以转染24小时候加适量培液。我们10cm的dish24小时后再补加5ml的培液，48小时后取上清感染。祝好:)

作者: pla269 时间: 2011-6-22 01:21

我也做慢病毒包装，液体黄，对收48小时内的上清没有太大影响，但是对你下一步感染目的细胞就有影响了，你最好浓缩一下病毒，既去除杂质又换了溶剂，何乐而不为呢

作者: liangaming1986 时间: 2011-6-22 14:52

闫禹？

作者: liulipingldyy 时间: 2011-6-24 19:49

路过，看到各位的帖子，觉得IPS还是可做的，给我很大信心，谢谢！

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