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标题:
ips复苏的问题
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作者:
573639471
时间:
2011-6-18 18:25
标题:
ips复苏的问题
ips离心去除DMSO后，重悬时是要彻底吹散成单细胞吗 如图2 还是有小集落是正常的 如图1
作者:
干细胞狂想
时间:
2011-6-18 19:20
比较奇怪呢，不过解冻后，要多吹吹，我一般不离心，吹散直接加10倍体积的培养液培养，还挺好的！
作者:
sdjjfangfang
时间:
2011-6-19 10:47
和复苏ES细胞是一样的呀。我觉得iPS相对于ES来说，还是不是很一样，进行小心操作。吹的越散，细胞的存活概率越小
作者:
liaowei
时间:
2011-6-19 21:14
吹成单个的细胞那iPS细胞的存活率很低的，要不就会分化掉。集落大点种下去可能存活率高，复苏效率也要好点！
作者:
hansey
时间:
2011-6-24 10:24
当然不能吹成单细胞了，如果吹成单细胞是很难形成克隆的
作者:
573639471
时间:
2011-6-24 17:26
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hansey
的帖子
8 r( ]( e, k. g& _8 u+ Z2 P2 j
# d9 u4 l' K# z& F5 r. [: u
是实验经验还是文献报道，还是兼而有之
作者:
dilal
时间:
2011-6-25 09:34
小鼠iPS细胞要吹得散一些，防止其分化。人的iPS细胞好像不可以吹得太散，不利于细胞集落的形成。
作者:
573639471
时间:
2011-6-25 12:28
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dilal
的帖子
5 m, N' Z7 N, {7 U* W0 d, E. T# x
9 ]- N s, P2 T/ Z2 w( _: \
谢谢 好像是，我的6天了 未观察到克隆，估计悲催了
作者:
白巧克力
时间:
2011-10-26 11:17
鼠的iPS克隆必须要吹成单细胞，但人的一定不能吹成单细胞，必须以团块的形式。您都没说您的iPS细胞是H还是M。。。
作者:
guoanson
时间:
2011-10-26 11:29
吹成单细胞也可以，不过要加其他的因子（如Y），形成克隆后可以换回来原来的培养基~
作者:
细胞-77
时间:
2011-11-6 09:37
我们实验室是把要复苏的细胞进行十倍稀释，然后离心，离心后用加含有Y27632的培养液重悬，不可以把细胞吹成单个，这样细胞不宜形成克隆，而且容易分化。
作者:
573639471
时间:
2011-11-6 10:00
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细胞-77
的帖子
L5 |" {4 O0 V- l
$ C# ]5 ?% V9 Y/ y6 V5 y) V& O
y27632都是i在哪买，使用量是多少
作者:
前途似锦
时间:
2011-11-7 17:13
是人的？怎么看着细胞那么不园乎？
作者:
573639471
时间:
2011-11-8 09:54
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前途似锦
的帖子
6 w5 j$ I# O1 t8 R; N: X; A
8 k) v+ q; L. }2 f* o e6 }9 H
是人的，可能 状态不好吧
作者:
wolfgang
时间:
2011-11-9 10:10
鼠的iPS单细胞是必须的。人的相反，必须保持团块状。
作者:
573639471
时间:
2011-11-21 21:04
Y27632使用量是多少 ？？？？
作者:
573639471
时间:
2011-11-21 21:06
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guoanson
的帖子
4 ]7 u4 N# z: K+ {
4 U6 p& M2 Y4 i a! R% e
Y 要加多少
$ g& p) m3 S, I3 v+ o
还有其他的？
! s- B# g1 H: A* r. ]* q+ g
多谢啊
作者:
song58
时间:
2011-11-22 09:20
个人经验：
/ J q9 x! G, [- Y% u4 M1 \+ Q
100nM，传代前后各处理8小时
作者:
573639471
时间:
2011-11-22 18:18
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song58
的帖子
' K, Q, o$ Q }% x. M
1 n+ X0 N, X0 I( _& D0 {, Q" |9 Q
Y27632 不是提高复苏存活率吗？是复苏后加入吧 咋是传代前后呢
作者:
song58
时间:
2011-11-23 09:48
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573639471
的帖子
( D& u% H; l# s3 [: z9 W
4 E" P5 {. s- v! h
恩，我现在很久没用过了，但是以前用的时候确实是在传代前后都处理，而且这个方法就是follow文献里的protocol。
@& l, p5 @* n) f
5 i5 x7 T9 V- q$ X/ v8 j# T
今天我特意搜了一下，应该可以作为参考
+ l9 J9 j, e2 y% |8 L: d6 `
An efficient and easy-to-use cryopreservation protocol for human ES and iPS cells.
3 Y( j' d+ m; I6 [: x' x+ Q
: r6 ^8 h( G7 Y8 z/ @
Baharvand H, Salekdeh GH, Taei A, Mollamohammadi S.
) N* x- l! r. f9 `+ ^
* F0 J! i1 m; u4 E
Nat Protoc. 2010;5(3):588-94.
. J9 T* K% X) E' V5 _& y
作者:
573639471
时间:
2011-11-24 00:03
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song58
的帖子
+ ^) H2 ]3 h- |9 L7 \4 V7 t' n" w
. D3 t, t/ [5 N! K7 R3 r% c4 G
非常感谢 但是没下到全文呵呵
作者:
sarah19860420
时间:
2011-11-24 04:42
如果是小鼠的可以吹成单个细胞。如果是人的IPS那么最好吹成一些细胞团为宜。亲身体验。第一次传人的IPS，消化一定时间后，细胞成大团状，怎么都吹不散，后来气愤了，对细胞进行了一番折磨，基本上都是单个的了，（这是我没想到的结果），现在细胞也在报复我，基本看不见几个克隆，而且不生长，只能耐心的等下去了。555
作者:
majing217
时间:
2011-11-24 13:33
吹得太散了，很难形成克隆
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