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标题: 求救哇，G418筛选ES~ [打印本页]

作者: always_wp 时间: 2011-6-22 11:08 标题: 求救哇，G418筛选ES~

呃，在向ES中转染个目的基因，随后进行移植，可是现在要用G418进行压力筛选，高手们给我点建议吧，谢谢啊

作者: lili_19840516 时间: 2011-6-22 12:55

我上传了一个protocal，你看一下有没有用。
一般转染后要先确定G418的筛选浓度，然后挑选单克隆就可以。

作者: always_wp 时间: 2011-6-22 23:19

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谢谢啦，我先看看啊

作者: sdjjfangfang 时间: 2011-6-23 08:38

转染之前要先筛选G418的作用浓度。设置浓度梯度，大概7天左右的时间，如果让正常的ES全部死亡的浓度，应该是你筛选的合适浓度。筛选的时候要考虑一下MEF的耐受程度哦。我们之前是在feeder free上进行筛选的。

作者: always_wp 时间: 2011-6-23 10:13

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哇呀呀，又见feeder freed~！
那筛选的浓度范围是在多大的浓度范围内进行筛选的呢，必须要从100-1000ug/ml之内，每间隔100来筛选么。
谢谢啊1 n5 V: n# K$ w t

作者: sdjjfangfang 时间: 2011-6-25 10:13

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呵呵，说在feeder free上进行筛选是为了防止MEF对于G418耐受差，以免出现ES还没有筛出来，但是MEF已经支持不住的情况。关于浓度范围，你可以查阅一下文献，看看用G418筛选时，大家用的都是什么浓度。

作者: always_wp 时间: 2011-6-26 16:34

回复 sdjjfangfang 的帖子7 k% y' P2 n$ \$ G& k
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恩，我查阅的干细胞的耐受性应该比较低大约200，300ug/ml，不知道你们做实验的时候，选取怎么样的范围呢

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