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标题: 脂肪干细胞P3代图片：哪位大虾知道发亮的是什么东东？ [打印本页]
作者: franty    时间: 2011-6-24 01:55     标题: 脂肪干细胞P3代图片：哪位大虾知道发亮的是什么东东？

本帖最后由 franty 于 2011-6-24 01:57 编辑 5 G# E7 j* ]. _8 F: p" s% j

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×200
作者: 临床干细胞    时间: 2011-6-24 03:27

正常，细胞还没有完全纯化，再养几天这样的就会越来越少了，但是要想一点没有也不正常
作者: franty    时间: 2011-6-24 06:20

哦，谢谢！但那些发亮的是细胞？脂滴？胶质？
作者: franty    时间: 2011-6-24 06:20

回复 临床干细胞 的帖子+ M2 L  C& z2 |1 ]* p: u; S
( F0 `+ \- d1 S: v# s( S
哦，谢谢！但那些发亮的是细胞？脂滴？胶质 1 l& \8 ^7 [8 K# m7 l' |  o  h
作者: yiyeqiu    时间: 2011-6-24 08:35

细胞表面看起来很不干净啊
作者: 流浪的波斯猫    时间: 2011-6-24 09:02

不知道你这细胞是个什么状态 是刚换完液还是刚传代 还是刚复苏，感觉细胞的密度不是很大的哇
作者: 临床干细胞    时间: 2011-6-24 09:10

franty 发表于 2011-6-24 06:20
; ^) i) q6 e& W& j/ p% E& U' |, H) D回复 临床干细胞 的帖子) A* J( o* H2 H

, k6 b# R6 ], h8 N0 z+ R, N4 p哦，谢谢！但那些发亮的是细胞？脂滴？胶质

0 b3 ~5 m. P# ~可能快死的细胞
作者: pla269    时间: 2011-6-24 13:35

你应该是用的是相差显微镜拍的，细胞在不同的层面上，增量的细胞层面要靠上一点，它的折光性自然有差异
作者: runsong    时间: 2011-6-24 14:12

同意楼上，光的干涉。
作者: franty    时间: 2011-6-24 15:29

回复 yiyeqiu 的帖子5 r( h4 u$ V' K7 v' g

7 M  z/ f- L. m: e  q/ U换液的时候都要用PBS洗2、3次的，不知道为什么会这样。除了用PBS洗，还有什么好办法吗？
作者: franty    时间: 2011-6-24 15:34

回复 流浪的波斯猫 的帖子
3 H: C2 `1 b" C+ y
. r9 H/ N3 A' T2 n. `9 F2 w$ G1 ZP3第6天，细胞密度不均，这是密度低的一个视野。
作者: franty    时间: 2011-6-24 15:38

回复 pla269 的帖子7 b- z  \! Q0 G; R( T! d% h0 c

* S+ M! }* {' l3 \6 k0 _对，是用的倒置相差显微镜拍的。什么是增量的细胞啊？你的意思是说刚刚分裂出来的细胞吗？
作者: sdyinong    时间: 2011-6-24 16:41

再养几天看看有什么变化吗？发亮的小东西会不会增多，现在养细胞要十分注意真菌污染，如果小球增多那很可能是污染
作者: pla269    时间: 2011-6-24 17:30

相差显微镜可以看到不同层面的细胞，并且可以看到细胞的立体形态，所以整体上在相差显微镜上的视野要亮一些，如果在不同层面上的细胞它的折光性差异就更大了
作者: hxf_86    时间: 2011-6-24 21:33

同意楼上楼上的楼上，应该是相差显微镜的缘故。当你细胞养的很满密度很大的时候，也会有这些发亮的小泡的
作者: biovictor    时间: 2011-6-25 19:28

细胞状态不行了，老化了！
作者: 841961279    时间: 2011-6-26 14:32

我最近做的原代脂肪干细胞也有这样的东西出现，还以为是我培液太久的缘故，
作者: franty    时间: 2011-6-27 11:52

回复 sdyinong 的帖子- S' `$ n4 w  f% v5 u3 ^

/ ~, W/ e) L( ^5 J/ G/ w% x. N再养的几天发亮的东东就不见了，应该不是污染！昨天给我们实验室老师看，说是刚分裂的细胞。
作者: franty    时间: 2011-6-27 11:57

回复 841961279 的帖子
( H: M- N, X' R. e  r, L3 J
  f/ M7 J5 t" W我们实验室老师说，是刚分裂出来的细胞。因为细胞分裂时是要脱壁的，结合上面大虾们说的，由于相差，所以发亮的东东，只是正在脱壁分裂的细胞。细胞分裂的时间很短，通常看不到。只是碰巧被我们看到了。哈哈，好有趣！
作者: franty    时间: 2011-6-27 12:03

回复 biovictor 的帖子
3 A8 F7 P$ {9 n- A& H! r& C+ A4 I& [/ H2 m5 u. g0 |/ ~6 v. O' o$ R
是啊，我养了好几次原代都是P2，P3代就老化，我都愁死了。请教这位大虾有什么好办法没有啊？
作者: yiyeqiu    时间: 2011-6-30 17:01

回复 franty 的帖子& f: _+ V% ~, `3 Q

0 J0 a" i* N9 A# N* \2 C; f+ h: ?还可以用胰酶初步润洗一下的，然后再用PBS洗，最后要用胰酶消化。注意，使用胰酶润洗和消化一定不能过度。
作者: yiyeqiu    时间: 2011-6-30 17:03

回复 franty 的帖子7 q2 A8 @) k) k, ^+ l- H5 Q9 i
+ [. s& t, p. o& W( k/ K4 c: J
可以尝试用胰酶初步润洗一下，然后用PBS洗两遍，最后再用胰酶消化。需要注意的是，用胰酶润洗和消化都要把握好，不要过头。
作者: yiyeqiu    时间: 2011-6-30 17:03

回复 franty 的帖子
  P' Q6 R+ x9 v( m$ r& r3 j; r1 @& J/ w
, B8 \! l4 t$ U' j6 K: ~. U% B可以尝试用胰酶初步润洗一下，然后用PBS洗两遍，最后再用胰酶消化。需要注意的是，用胰酶润洗和消化都要把握好，不要过头。
作者: bllx58    时间: 2011-7-9 09:26

折光性不同而已，楼主不必担心，不是异物
作者: zerollx    时间: 2011-7-11 23:58

回复 franty 的帖子7 Z3 [2 s/ }8 B, G0 S% b* O
) S4 D; \7 ~1 t5 ~" N2 ^$ ]5 N
我养的是小鼠 的脂肪干，也出现这样的情况，不过仅在密度大的时候才出现，而且3代以后就没不会再出现了，若是分裂时的细胞，为什么3代以后就没有呢，所以我对你老师所说的话很表示怀疑，当然我是做小鼠的，不知道你做的是什么动物的，也许有物种差异也说不定！
作者: zerollx    时间: 2011-7-12 00:11

本帖最后由 zerollx 于 2011-7-12 00:17 编辑
  T  M3 p5 N8 a. \9 L$ n( a$ o& C7 Q) w; U' k% x
回复 franty 的帖子
$ w* Q- f( d2 q5 @0 j& R" ]  a1 s
2 L& b. C7 W) ]: e. O% A培养体系、消化体系、供体年龄、组织来源、抗氧化机制都是影响其生长的重要因素，不过我觉得最重要的还是培养体系的问题，多查阅相关文献，看英文的，论坛里有很多这方面的资料，我也分享过几篇小鼠方面的，你可以借鉴一下，多尝试几次，失败后总结经验与教训就能出来,这东西不难，祝你顺利！！
作者: ice_taisy    时间: 2011-7-12 13:34

快死的细胞和正在分裂的细胞都会亮一些，不过你照片上两点的位置，大小不像这两种情况。脂肪干细胞和脂肪里面的MSCs是什么关系啊？脂肪干细胞是MSCs不完全分化成脂肪的一个中间状态吗？
作者: zerollx    时间: 2011-7-14 00:24

回复 ice_taisy 的帖子5 s3 d" p1 z! g) E5 t9 r7 F) _% f
. H# j. L1 W" \- J  G
我们常说的脂肪干细胞就是脂肪组织来源的一种多能性干细胞，其也属于间充质来源，所以二者是同一个概念！
作者: ice_taisy    时间: 2011-7-15 08:39

回复 zerollx 的帖子) V% A7 K. Y- c+ Y; \; e/ p
& x3 u( f4 O& ^
知道了，谢谢！
作者: 相宜    时间: 2012-4-12 22:51

回复 pla269 的帖子: ~8 |% x9 [4 a( O1 Q# d
6 z2 h$ P& I, A/ L7 i# M! T0 H
嗯 我最近刚做，觉得您说的对。
作者: 冰枫de梦    时间: 2012-4-13 08:44

应该是细胞，可能是状态不好没有贴壁吧
作者: yanwu_1    时间: 2012-6-11 13:27

回复 franty 的帖子
5 W$ |& x  t- H' t% o4 K3 W( Q" F# R1 x6 p8 X# ~' w' L
应该是消化的脂肪细胞，传代后会减少甚至消失不见。
作者: 举锅    时间: 2012-6-11 15:55

我也遇到啊，不过觉得应该是脂肪细胞之类的东西吧，传代一次就少很多。顺便问一下楼主养这个脂肪干细胞好消化不，我消化0.25胰酶放到培养箱要消化将近10分钟...每次都害怕消化过头了。
作者: lyb870412    时间: 2012-6-11 18:10

刚分裂出的小细胞或是贴壁不牢的细胞皱缩成团，话说你这细胞才第三代形态就这么扁了呀
作者: 帝国黑骑士    时间: 2012-6-12 17:00

回复 举锅 的帖子
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- `! A! G) y" t5 P没有那么难消化吧！十分钟，细胞受得了啊！
作者: 帝国黑骑士    时间: 2012-6-12 17:02

小亮点应该是刚分裂的细胞还没贴壁，所以看起来比较亮！
作者: 举锅    时间: 2012-6-15 14:04

回复 帝国黑骑士 的帖子2 G  W8 q3 i! n$ c6 ]& X# E

8 w* e: O1 u2 [就是很难消化，但是消化了细胞活率倒不会降低...不晓得为啥
作者: meister    时间: 2012-6-25 15:39

回复 franty 的帖子, p6 I6 d: ?7 O. M9 k& G
: P# j2 V3 m3 ]. u/ o
死细胞
作者: pailishi    时间: 2012-6-26 08:47

没必要每次都洗啊，除非细胞很脏，而且我觉得你这个细胞也还正常
作者: pailishi    时间: 2012-6-26 08:52

我们用的是0.05%的胰酶，先将胰酶和DPBS预热，将培养皿或培养瓶中的培养基去掉，用预热的DPBS洗一次，加入预热的胰酶（3ml/100皿），放入培养箱中1-2min,镜检发现细胞变圆立即中和，这是很容易消化下来的
作者: kqzhangx    时间: 2012-8-26 21:02

个人觉得像是死细胞
作者: 冰枫de梦    时间: 2012-9-4 18:18

发亮的也是细胞，可能是同类细胞，只是没有伸展开折光性比较强。
作者: kqzhangx    时间: 2012-9-19 08:31

我觉得没什么问题。传一代应该就OK了



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