干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 脐带间充质干细胞分离时要不要剥胶 [打印本页]

作者: 352167963 时间: 2011-6-24 12:53 标题: 脐带间充质干细胞分离时要不要剥胶

通常我们都先去除静脉壁和动脉以后剥取华通氏胶剪碎，然后进行组织培养。但是剥取华通氏胶的工作很费时费力。我听别人说去除静脉壁和两根动脉以后就可以直接剪碎进行组织培养。求教到底可不可以不用剥胶。利弊分析。

作者: 1301918986 时间: 2011-6-24 12:56

我们目前是去除静脉壁和两根动脉后就直接剪碎进行组织培养的。

作者: sizhengliu 时间: 2011-6-24 21:17

回复 1301918986 的帖子

请问你们的原代组织多少天能长出细胞来？

作者: 呼吸 时间: 2011-6-24 21:34

要拨胶的，这样原代细胞会长的更好更纯，费时费力是一定的，磨刀不误砍材工嘛。还是强烈建议拨胶。

作者: 352167963 时间: 2011-6-25 11:28

回复 sizhengliu 的帖子

一般情况下第七天第一次换液，然后再见个六天第二次换液

作者: 352167963 时间: 2011-6-25 11:29

回复 sizhengliu 的帖子

第一次换液是没有细胞的第二次会有小部分出现

作者: 352167963 时间: 2011-6-25 11:32

回复呼吸的帖子
* R. Y7 T" T9 v# a1 P4 n3 @0 t) {2 v
这个我们也讨论过，他们说关系不大。所以这个利弊需要衡量。到底利大于弊还是弊大于利。在以后的生产过程中到底该怎么办

作者: 1301918986 时间: 2011-6-25 12:25

回复 sizhengliu 的帖子" I8 j5 ~, F% u8 ~

我们的原代差不多十来天吧，两个星期左右可以传代。

作者: sizhengliu 时间: 2011-6-25 20:07

回复 1301918986 的帖子

这样的话，你们的组织应该是很多的，一根脐带能做好几个T75吧！

作者: 呼吸 时间: 2011-6-27 09:12

回复 352167963 的帖子4 u$ K! m$ ~! d$ P
6 K f4 p. L \5 `6 {) b/ Q m
我们的技术已经应用于生产，一根30厘米的脐带，传到二代就开始冻存，至少可以冻存300支（每支2.2乘10的7次方），这个量应该还算可以吧。

作者: 352167963 时间: 2011-6-27 09:16

回复呼吸的帖子2 m: Q5 k! m I7 F: ?: [
* A# m, E6 T1 H
恩谢谢啊

作者: 1301918986 时间: 2011-6-27 12:49

回复 sizhengliu 的帖子% Q, z3 v2 E3 H3 f5 ` F4 x
) V* ^0 s/ M, Y3 d( X, W' L4 n
恩，是啊，每次都做七八个皿，还会剩好多脐带。我们没有用培养瓶，因为组织块不好放进去。

作者: 352167963 时间: 2011-6-27 13:45

回复 1301918986 的帖子
: f' D5 V6 O8 R1 v+ g% C8 q
怎么回事啊我都糊涂了组织块剪碎不久放进培养瓶里了吗

作者: sizhengliu 时间: 2011-6-27 15:34

回复呼吸的帖子- b% p) D5 {+ T8 b$ _$ M" d4 Z

你好！你们的产量如此大，说明技术应该很成熟了！请问你们拔胶用的什么工具啊？谢谢

作者: 呼吸 时间: 2011-6-27 15:37

回复 sizhengliu 的帖子5 E" R; F9 u$ {( J( @

有齿镊子

作者: 呼吸 时间: 2011-6-27 15:38

回复 sizhengliu 的帖子

如果熟练的话，基本上整理流程下来一个小时左右。

作者: 1301918986 时间: 2011-6-28 08:47

回复 352167963 的帖子; r2 X3 w/ h9 h' P, w* i

呵呵，我说我们一直是用的培养皿啊，剪成组织块后就放进皿了啊。

作者: 1301918986 时间: 2011-6-28 08:49

回复呼吸的帖子1 \; D" C0 `7 R9 P9 v1 [

呵呵，你们已经用于生产了，那是用没消化法培养的吗？

作者: zhangruiting 时间: 2011-7-28 09:51

剥胶和不剥胶的培养效果没有多大的区别，原代的细胞一般是五六天的需要半量换液，后面换液的天数递减，换三次左右就可以传代培养啦！

作者: sunjianhua2000 时间: 2011-7-28 10:04

我们做的时候是拨胶的，请问上面大侠，你们脐带干细胞用于生产，那问冒昧的问一下，你们生产过程中用的培养液是什么牌子的，谢谢

作者: forcat 时间: 2011-7-29 14:03

sunjianhua2000 发表于 2011-7-28 10:04
$ \+ s* E5 n& T% r2 P我们做的时候是拨胶的，请问上面大侠，你们脐带干细胞用于生产，那问冒昧的问一下，你们生产过程中用的培养 ...

+ M6 h$ Z9 J. d3 e, k
目前国内外都有很多培养基，含血清和不含血清的都有，牌子不是最重要的，关键在于性价比，适合自己的就好。

作者: zhangruiting 时间: 2011-7-29 15:38

用的是gibico的不过要根据你细胞的生长情况使用培养液细胞生长状况不好的原因不一定是使用培养液的问题其中有很多影响因素

作者: wangweilie0418 时间: 2011-8-1 10:02

我们要剥胶，

作者: mbpsky 时间: 2011-8-4 14:12

去除静脉和两根动脉，直接剪碎进行组织贴块培养，不用去除胶

作者: 干细胞谷 时间: 2011-8-4 14:42

数量是很多，但质量如何？是否做过鉴定？

作者: ganggangtry100 时间: 2011-8-4 15:52

为了省时可不用拨胶，我们两种方法都用过，细胞流式结果差不多的！

作者: hwlightning 时间: 2011-8-4 17:07

回复呼吸的帖子7 F) { k5 j( q7 u/ T5 X

请问下你们脐带用于生产剥胶了吗？# ~% t' ~5 I- q( _6 }' V5 d
是不是第一次培养基只用盖过组织块就可以了，5 y9 L X- r. w% ^& u6 I
我是把组织块贴培养皿上后，加入培养基，后面都是补加培养基。
你用的是什么牌子的培养基？
谢谢答复

作者: hwlightning 时间: 2011-8-4 17:08

不剥离胶也能长，但是我不知道跟剥离后是不是更多更纯？？？0 ~ n6 F% G' j$ g% a; r, ~" m3 e
请问下各位用的是什么培养基？需要加因子吗？

作者: lizzy_81 时间: 2011-8-4 17:13

一般还是剥胶比较好吧。你一根脐带怎么能获得这么多细胞啊

作者: 柏林小杨 时间: 2011-8-5 15:39

回复 lizzy_81 的帖子4 |0 _8 [) J% q7 d
; i2 f2 N& {, N
我们分的时候也没拨胶，流式结果还是很好的。

作者: hwlightning 时间: 2011-8-6 06:57

柏林小杨发表于 2011-8-5 15:39 ) O) ]. B5 ]5 U2 J; K' Y- Z
回复 lizzy_81 的帖子9 h% y" U( U6 U: S5 y; E9 R- ^
. m% k9 c" Q# ^( n. o/ ^7 b0 T
我们分的时候也没拨胶，流式结果还是很好的。

3 a6 E3 {7 b; k7 y
能说下你用的什么牌子的培养基吗

作者: 352167963 时间: 2011-8-8 16:46

回复 lizzy_81 的帖子
& r5 Q" p8 O$ Z" I
传代啊一根15厘米的脐带大概可以养8到10瓶的组织块，然后安1：3传一代，再按1:8传2代。最后一共可以有200-300瓶的细胞。每瓶收集1x107 左右的细胞，你算算细胞的量，，，，

作者: wangweilie0418 时间: 2011-8-9 11:46

虽然剥胶比较费事，但是培养时需去除静脉血管壁，防止其中的细胞对间充质干细胞产生影响。另外，剥胶时不要携带有羊膜细胞，影响干细胞纯度。

作者: youtellme 时间: 2011-8-13 02:35

不剥的话，细胞纯度可能不高。要多传几代来纯化，剥的话其实血管周围的间充质干细胞是比较丰富的。要看你目的是大量获取细胞，还是做研究。

作者: 352167963 时间: 2011-8-16 09:17

回复 youtellme 的帖子" k) g/ v4 P4 B
- d7 a" i) z, f3 u5 n4 b, o
做治疗啊细胞量当然是越多越好啊。其实看了好多的帖子都有关于羊膜干细胞分离的，有机会在仔细看看。9 \3 V( f/ m$ D. Z5 k x

作者: stand_up 时间: 2011-8-17 14:12

前一阵刚从医院拿来的脐带，我的是第11天长出来的零星的几个，第二天就成一小片了

作者: youtellme 时间: 2011-8-17 14:14

回复 352167963 的帖子

呵呵，那你的分离方法不一样，可为你做治疗多一个概念营销的。

作者: yinjiqingqq 时间: 2011-8-17 15:07

你所提到的胶是不是要将羊膜去除阿，反正已经有文献报道提到不去除羊膜也不会影响细胞的纯度

作者: fengxuan 时间: 2011-8-17 16:51

剔除静脉和两根动脉，酶消化，不用剥胶

作者: 352167963 时间: 2011-8-18 08:50

回复 fengxuan 的帖子0 V! {( K, u! ]- E+ y; y! q
! C1 `; z+ Q; j N0 I) |
能具体说一下吗？

作者: chengde266 时间: 2011-8-18 16:32

去除动静脉，如果用酶消化法，不用剥胶就可以，传代几次后就能保证细胞纯度；如果组织块贴壁，建议剥胶。4 o6 X9 A' K6 l+ R7 ]5 F1 N f, f, d m
我两种方法都做过，组织块不剥胶，基本长不出来。
这是我自己培养过程的一点经验。

作者: chengde266 时间: 2011-8-18 16:32

去除动静脉，如果用酶消化法，不用剥胶就可以，传代几次后就能保证细胞纯度；如果组织块贴壁，建议剥胶。) S2 w; J2 ^; v& {& A3 X: A
我两种方法都做过，组织块不剥胶，基本长不出来。
这是我自己培养过程的一点经验。

作者: 1301918986 时间: 2011-8-19 08:36

回复 chengde266 的帖子
# j0 W/ f( B. r8 F0 s( k
请问一下，你们所谓的剥胶是什么？是去除表面的羊膜层吗，可是我一直就没把它剥掉过。

作者: chengde266 时间: 2011-8-31 10:32

回复 1301918986 的帖子# j6 X m: m' E4 U6 ]4 G) ]1 h- m

可以这么说，也就是把华尔通胶从表皮上剥下来。

作者: wangweilie0418 时间: 2011-9-3 09:13

      我们做的时候会去剥胶，因为间充质干细胞存在于华顿氏胶中，这样可以排除其他组织对培养的影响。有以下几点体会：
   1.取来脐带24h内进行分离剥胶
   2.尽量不要用双抗，以免影响细胞活力) Z5 M# A7 s/ V5 L
   3.洗的时候一定要洗干净，洗净表面及动静脉血管内的血液，防止脐血细胞的影响，去除有淤血和夹痕的地方% j6 v$ ?+ t1 R0 U6 V. P. W/ I
   4.检查保存液（我们用生理盐水）有无污染
   5.将脐带剪成2cm左右的小段来剥胶，易于操作。
   6.剥胶时静脉内表皮要去除干净，防止静脉内皮下干细胞的混杂
   7.剥胶时不要撕破外层的羊膜层，以免影响MSC的纯度

作者: 300000 时间: 2011-9-16 16:25

回复呼吸的帖子; @3 u" J% s) B; ?. n- f; |+ E

你好，看了您的帖子，我很惊讶。我的QQ554890604，望交流下！

作者: ljzmy82 时间: 2011-9-16 16:47

回复呼吸的帖子# S& m' @0 U/ K! I& b

那样分离的细胞不光是脐带干细胞还有羊膜干细胞

作者: hyingcell 时间: 2011-12-6 11:48

回复呼吸的帖子( B( ~& X" `9 [4 p! @) P- y- j! f
; Z' n7 C' u# Z. u: {
你们用的那种培养基？原代细胞长到什么状态传代，谢谢

作者: deshenglll 时间: 2011-12-6 13:39

可以去除动脉及静脉后直接剪碎培养的。不过你的脐带外表面要消毒彻底一点。防止污染。我们做生产的。一般细胞在3到5天就可以有细胞了。慢点的7天左右吧。传代时间一般在10天左右。上下浮动2天。

作者: fespysok 时间: 2011-12-7 09:30

剥胶得到的细胞量比不剥胶直接剪碎得到的细胞量要大，我做过比较试验的，能多三倍细胞量。

作者: tiduswang 时间: 2011-12-12 17:55

我们是采取剥胶方式，如果技术好，细胞很快生长，一般3天换一次液；弊端有可能你剥离的不是想要的，不会生长!!

作者: yanwu_1 时间: 2011-12-13 13:56

直接拨胶和去除血管剪碎，两种方法其实差异并不大，后者原代的杂细胞肯定多一些，但在传代的时候，通过控制消化时间，一些巨噬细胞和内皮细胞都是可以分离掉的，后面再传代裴昂，差异就更小了......

作者: yanwu_1 时间: 2011-12-13 13:59

间充质干消化很容易的，37度1-2min就可以，其他的杂细胞或老化的细胞会很慢

作者: 透明之蓝 时间: 2011-12-13 14:25

352167963 发表于 2011-6-24 12:53
, ]& X3 T3 R& `( W- C通常我们都先去除静脉壁和动脉以后剥取华通氏胶剪碎，然后进行组织培养。但是剥取华通氏胶的工作很费时费力 ...

我们是用75%的酒精浸泡期待后，就容易剥皮了（相对的，其实还是不太容易），然后除去血管，省下的都是华通氏胶，不用剪碎，要不容易飘起来，影响细胞爬出，大块的贴壁！

作者: 透明之蓝 时间: 2011-12-13 14:26

透明之蓝发表于 2011-12-13 14:25 $ x0 U* U4 A5 h/ h
我们是用75%的酒精浸泡期待后，就容易剥皮了（相对的，其实还是不太容易），然后除去血管，省下的都是华通 ...

开始用培养皿培养的，所以不换液，只补液

作者: yanwu_1 时间: 2011-12-14 09:39

不剪碎，细胞能爬出来吗？

作者: ytumuyangren 时间: 2013-12-29 01:16

回复呼吸的帖子
/ }. { s: Q ~; U7 k
你们的技术也太成熟了吧，能得到那么多细胞？有什么经验吗？

作者: deshenglll 时间: 2014-1-2 10:55

回复 352167963 的帖子

也可以不剥胶。只是消毒要彻底点。要不污染几率会加大。效果还是比较好的。

作者: weijunning 时间: 2014-1-2 15:06

回复 chengde266 的帖子
# M v1 e8 p% x$ w$ _9 N
我们的组织块不剥胶，第5天就有细胞长出了。

作者: wf78365421 时间: 2014-2-10 13:12

剥胶得到的细胞量比不剥胶直接剪碎得到的细胞量要大

作者: 月_幻影 时间: 2014-2-10 13:25

剥胶得到的细胞更纯一些，而且剥胶剪碎后铺瓶更有利于细胞爬出。

作者: 孙帅帅 时间: 2014-2-13 08:47

回复呼吸的帖子- R* K. j' A( p2 t0 F: O/ b
9 t- c% Q% U' R4 M+ o- y& @# s
你们是怎么养的怎么那么多啊！！！

作者: 孙帅帅 时间: 2014-2-13 08:49

如果不分离表皮，长出来的细胞可能会很杂；还是剥除比较好

作者: yanwu_1 时间: 2014-2-14 14:40

严格来说，在剔除动脉和静脉后，剥离华通氏胶，表皮是不要的。但是个人实验证明，少许表皮的存在并不存在对干细胞的表观可见影响。只是在原代培养过程中会出现许多表皮细胞的干扰，显微观察为圆点状，不贴壁，极易去除。

作者: Amanda121201 时间: 2014-2-17 10:21

去除动静脉三条后还要把脐带皮除掉否则会有表皮细胞掺杂胶块多数会在一个礼拜左右就爬出细胞干细胞阳性率也跟手法相关不过如果有些许不纯净传代三代后就可以保证较高率的干细胞了

作者: flylover1221 时间: 2014-2-17 16:50

这个看脐带状态，有的脐带送来时细或者有残留的凝血，建议不进行处理。要是能得到肥壮的脐带，还是剥离更好。注意分离时间不要太长，适当补充PBS润湿。

作者: 飞花1698 时间: 2014-2-18 10:43

回复呼吸的帖子

可以分享一下您们的技术吗？我们实验室目前用酶消化法，但是细胞数量很不理想，总数仅有1×10的8次方左右。看到您的冻存量，简直把我惊呆了

作者: 龙七 时间: 2014-2-25 14:12

不剥皮培养的话很容易长的细胞不纯，有表皮细胞生长，虽然用胰酶消化时也能去除，但总有一定影响，建议还是剥皮培养较好。

作者: qing_hua1987 时间: 2014-3-24 10:55

我们现在都是剥胶, h& S" l; c) }' s; c) {0 @9 e
。

作者: zhrt 时间: 2014-3-28 09:46

回复呼吸的帖子- b& x( H+ [: r
& [1 A/ y( P1 t7 ]% O
有的文献说只有华通式胶培养，他们有什么区别吗' T1 Q7 O) h2 y

作者: 大胖子阿哥 时间: 2019-9-29 09:57

回复呼吸的帖子
3 r* z) j" q! n& _2 u1 B& {) L
很厉害了请问老师剥胶了吗我感觉剥胶真的很难大概剪成什么样糊状还是颗粒？

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)