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脐带间充质干细胞的培养基要加什么因子
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作者:
1301918986
时间:
2011-6-28 08:58
标题:
脐带间充质干细胞的培养基要加什么因子
各位大侠，我最近开始培养脐带间充质细胞，每次原代都成功了，可是后面传代以后细胞的状态就很不好。应该是培养基的问题吧，我现在用的是DF12加10%胎牛血清养的，请问是不是还需要加生长因子之类的，浓度是多少？谢谢各位啦！
作者:
hslh
时间:
2011-6-28 09:21
我们加EGF
作者:
lili_19840516
时间:
2011-6-28 09:26
我们加的谷氨酰胺
作者:
352167963
时间:
2011-6-28 09:27
你要注意传代是原代细胞生长浓度，如果元代细胞长老的话，接种的效果就不会很好。同时也要注意传代时接种的浓度要适宜。然后培养基里面加的因子要包括贴壁因子和生长因子。
作者:
1301918986
时间:
2011-6-28 09:27
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hslh
的帖子
* B4 x/ L0 w/ `, l; Z T# J
* i8 n" Z) g* e2 }+ I
呵呵，谢谢啊，浓度是10ng/ml吗？
作者:
1301918986
时间:
2011-6-28 09:29
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lili_19840516
的帖子
) O& I/ ]: A/ n0 m. ?* V% d G
5 j8 g3 }2 J0 w( @- l
谷氨酰胺一般培养基里面不是都有吗？你的意思是它的浓度比较大，还要另外加吗？
作者:
1301918986
时间:
2011-6-28 09:34
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352167963
的帖子
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4 F. E7 E8 u# O0 t# d
原代啊，我用的是组织块培养法，当克隆中心的细胞比较密集的时候，我就传代了。传代接种密度差不多是1.5*104/cm2，应该不小吧。
作者:
352167963
时间:
2011-6-28 10:03
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1301918986
的帖子
) s2 @* f5 l! ~4 L- V: o* y
+ O j1 W/ m q5 o4 Z0 C9 F4 P
不是不小 是太多了 一般情况下适宜的接种浓度在0.9X104/cm2,,,接种浓度太高的话细胞的生长状态也不会很好的。
作者:
柏林小杨
时间:
2011-6-28 10:10
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1301918986
的帖子
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1 j0 v( X8 `4 y& J" L" v" s
你的组织块是怎么贴上的，我贴的组织块总是飘起来，好长时间也长不出细胞来，前提条件我们的培养基没有问题，用酶消化的细胞原代和传代后都长得很好，就是组织块长不出细胞来。
作者:
柏林小杨
时间:
2011-6-28 10:31
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1301918986
的帖子
% a. d7 S: t) K; y/ ^; s4 \
9 [& O+ }* N" _. ^' W& }
接种密度大了。
作者:
清影
时间:
2011-6-28 16:15
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柏林小杨
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! S! m/ B& E9 k& o
) D2 N( k7 ]# P* {$ z
嘻嘻，我来看看你哈，不要着急慢慢摸索着来，肯定能成功的，相信自己哈……
作者:
1301918986
时间:
2011-6-28 16:34
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352167963
的帖子
`: ^3 x3 J9 d6 l6 L
5 c' ]2 [3 G: A, ]: R; v
恩，是吧。第一代我姐的浓度大点，后面传代密度就不会这么大了，呵呵，灰常感谢。
作者:
1301918986
时间:
2011-6-28 16:36
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柏林小杨
的帖子
n/ G, a5 g3 J
' }$ }% n% Z* G" o. [! W
组织块如果飘起来的话细胞就不会爬出来了，所以首先要保证它贴壁啊，刚开始不要加太多培养液。
作者:
1301918986
时间:
2011-6-28 16:38
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柏林小杨
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( w& A' V8 v) P
, h$ L0 u' {& V6 @* _1 o# l
你们用没消化法事用的几型胶原酶啊？我用过I型的，消化不出来。
作者:
zhanglei1414
时间:
2011-6-28 18:37
用好血清，啥也不用加，照样长的好
作者:
1301918986
时间:
2011-6-29 08:34
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zhanglei1414
的帖子
5 ~4 U& y* z$ L* X
! z$ E1 Y- N3 r1 P! D# w) ]1 ^; O
用好血清啊，我们现在用的是四季青的，你帮忙推荐几种啊，谢谢。
作者:
zhanglei1414
时间:
2011-7-2 15:40
加拿大干细胞公司的间充质专用血清，GIBICO的血清，贵的就行，500毫升3000块钱左右的就差不多了
作者:
mason658616
时间:
2011-7-2 15:48
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柏林小杨
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5 Z$ c& u7 Z# ]; a6 j6 S
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我用酶消化法做的刚接种的时候细胞很多，可就是不贴壁，换两回液基本就没细胞了。这是出了什么问题？
作者:
1301918986
时间:
2011-7-4 08:40
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zhanglei1414
的帖子
$ o$ x/ X3 ~2 U9 \. Q+ {4 h
1 C7 k2 k5 z% |) M
呵呵，谢谢啊，确实很贵啊。
作者:
柏林小杨
时间:
2011-7-5 10:25
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mason658616
的帖子
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6 i3 I% q) H: f( H7 e
首先考虑你的培养基是否合适，其次就是细胞的活率问题及接种密度是否合适。
作者:
柏林小杨
时间:
2011-7-5 10:28
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1301918986
的帖子
3 j" C% s3 s, Y9 v; Z/ T& l
( ?8 g$ d% a; u+ ]$ S
我的能消化出来啊
作者:
1301918986
时间:
2011-7-5 10:42
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柏林小杨
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) C. g S& E7 I5 }5 m, |% O
4 d# _. t5 M; T; c; E1 j
你的原代用的是消化法吗？用的消化液是什么啊，我用胶原酶消化了一次没做出来。
作者:
柏林小杨
时间:
2011-7-5 10:44
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1301918986
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' }' d9 L5 \% E2 O
4 u$ ^6 o) c' {7 A
组织使用胶原酶消化的，你是不是消化时间过了，一个活细胞也没有吗？
作者:
1301918986
时间:
2011-7-6 08:37
我们是用I型胶原酶消化的，结果终止离心后没有发现细胞。不过我们没有拔胶，我不太清楚这个华通胶到底是什么？
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