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标题: 急用丝裂霉素过夜处理MEF [打印本页]

作者: congxiaoran 时间: 2011-6-30 17:23 标题: 急用丝裂霉素过夜处理MEF

请教各位用丝裂霉素过夜处理饲养层需要多大浓度？多长时间？多谢！

作者: yangpan521 时间: 2011-6-30 21:24

买成品的丝裂霉素共2mg,加入2ml的无血清培养基混匀，然后分装，使用时按100x 加就行了，处理时间不能超过2个半小时。

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-7-1 08:20

可以用10mlDMEM溶解2mg成品粉末，4℃过夜避光溶解，第二天过滤分装，20X浓储，-20℃保存，工作浓度为10ug/ml。使用时细胞达到正常传代密度即可，处理时新鲜培养液中加入相应量地丝裂霉素C

作者: congxiaoran 时间: 2011-7-1 13:10

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谢谢，还想请教下您试过过夜处理吗？

作者: congxiaoran 时间: 2011-7-1 13:11

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您的这种配液使用时是过夜处理吗？

作者: 前途似锦 时间: 2011-7-1 18:33

过夜处理，不好吧，我有次失误，但是你看细胞不会死，但是不敢用了

作者: yangpan521 时间: 2011-7-1 22:25

回复 congxiaoran 的帖子 J& |4 L& x2 ]2 m" W

没有，这样的浓度处理超过三个小时，细胞就会死的差不多了，已经不能在做饲养层。

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-7-2 15:59

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配制丝裂霉素的时候是过夜，处理细胞的时候不要超过2个小时" Q( r1 ?, R& s2 ?( I- V

作者: scottist 时间: 2011-7-13 16:37

浓度为10ug/ml，可用PBS分装为100X的，-20度冻存，yamanaka的nature protocol时间是2.5h，个人认为处理不超过3h就可以。

作者: youyou315 时间: 2011-7-20 23:10

我见过有的实验室用1ug/ml的浓度处理过夜，不过我没有试过，仅供楼主参考。

作者: ldy689689 时间: 2011-10-25 19:40

本帖最后由 ldy689689 于 2011-10-25 19:41 编辑 8 v( X9 u3 `4 t: q2 x" ?$ P V0 g

我们都是处理两个小时左右，要过夜处理也太夸张了吧

作者: ldy689689 时间: 2011-10-25 19:41

我们都是处理两个小时左右，你处理过夜也太夸张了吧！

作者: 是鸟就要去飞 时间: 2011-11-8 09:53

丝裂霉素C，10微克每毫升处理两小时。处理太长时间滋养层细胞的状态不是太好，且以前看过同种浓度不同时间处理滋养层的文献。处理时间长了，滋养层毒性就会增大。因为细胞代谢过程中，部分MMC会被吸收进去。但是你冻存时，滋养层体内的MMC不一定全部释放出来，所以我们组都是提前一天铺滋养层。处理时间短了，滋养层有可能被抑制住，这样情路就会很糟。它的分裂会带着干细胞的分化。所以还是严格的来做吧，祝你成功！

作者: tigerfish 时间: 2011-11-9 09:02

我个人不同意过夜处理。1 F/ s5 u z9 o, h/ f* e S
我目前的程序是0.5mg/ml, 2小时，用起来没问题

作者: momocy 时间: 2011-11-9 09:16

我们做的时候是处理3个小时。丝裂霉素 C 储存液（1mg/ml）用 MEF 培养基稀释
100倍即为丝裂霉素 C 工作液（工作浓度为 10μg/ml）/ y$ C: O* y* I7 J: Y, I
吸掉 P3代 MEF 培养皿中的培养基，每个 15cm 培养皿加 15ml 丝裂霉素C 工作6 d0 K- O5 ]1 Z" C
液，放 37℃，CO2培养箱中处理 3个小时。然后要加5ml DPBS 洗 3遍。

作者: sizhengliu 时间: 2012-1-2 23:22

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请问你们是MMC处理后不重新消化铺板吗？

作者: momocy 时间: 2012-1-5 13:09

回复 sizhengliu 的帖子' V$ i& M4 P5 c4 s/ s+ \
5 U# Y+ w: A3 q! S& Z
处理3个小时以后就用PBS洗3次，然后就冻存了

作者: houbara 时间: 2012-1-5 13:32

10ug/ml,处理2-3小时，完后PBS（-）洗三次。严禁过夜处理。

作者: shangchunhua 时间: 2012-1-5 13:47

我的操作和momocy比较接近，用10ug/ml的MMC处理MEF3个小时，用DPBS清洗五遍，然后消化，如果有实验需要就马上铺板，其余的细胞冻存起来

作者: w小会子 时间: 2012-3-14 16:29

恩，我们也是处理2小时，然后用PBS洗3-5遍

作者: abrn1012 时间: 2012-3-16 08:42

丝裂霉素C我们处理鸡胚成纤维细胞是处理2个半小时，工作浓度是10ug/ml

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