我也很是疑惑你到底是养神经干细胞还是海马神经元，请说明一下。 h X+ L& D/ Z0 l( r/ m C
如果是干细胞你的培养基就选错了，应该是DF12+2%B27+20ug/m L EGF+20ug/m LbFGF,这样养出来的干细胞是悬浮生长的神经球，不应该贴壁的。) Z V m4 I# i4 S; i, v1 p
如果是海马的神经元的培养，DMEM+B27无血清培养基是可以的，不过看你的照片细胞密度不够。原代培养的神经元培养，有密度依赖性。太少细胞也是不长的。再者，好像养神经元有其他的无血清培养基，你多看看文献。 % |. E+ I+ w1 z视野不干净有碎片可能是细胞碎片，与消化的时间长短和吹打力度都有关系。最初几天多一些，随着换液会减少并消失。 * a: m1 ^3 b, j作者: superlamp 时间: 2011-7-6 16:22
首先，从图片上看，有些不像海马神经元，而且你培养环境中杂质太多，会严重影响NSCs的存活或者活力； 5 j! a t* G. R1 J其次，你选用的培养基决定了你也不太可能培养出NSCs，培养基成分是具有选择性的， 4 R* a2 a. f/ D( } 我们现在用的是DMEM/F12+2%B27+2%L-N+1%LG+1%EGF+1%Bfgf；' T; A1 D9 T1 Z7 O" k4 W
再次，你的NSCs都贴壁了，也说明不太正常，应该是多层悬浮的；* N/ L4 b5 R9 ~
最后，需要说明的是，NSCs培养初期，需要高密度刺激增值，并可以帮助尽快剔除挑杂质细胞，你的细胞密度太低，同样可以造成细胞死亡。4 ?, Y, n3 d$ {1 B; D$ y
对于细胞碎片，离心换液的速度是很重要的，通常需要800r/5min，去上清，培养至第5代才比较纯； % k4 h: ~: Q1 F6 v% Q- p; J如果说是分化，你的细胞分化的形态也不对，伸张的“触角”成线状，而正常的不是这样，你可以到论坛里寻找些图片做参考。: L' V) Y9 r9 L0 L
综上，你的不太像NSCs，方法需要你多参考文献内容。作者: tk1504008 时间: 2011-8-23 16:55
Your coulture medium is not good enough for NSC proliferation and growth factors are the essential for self-renew and inhibit diffferentiation.The basic medium should be DMEM/F12 for neural cell culture including NSC for sure.2 I8 }* J2 ?( T% d( ]" N$ i
" [5 V/ x# R7 U* l9 N. v. rrecommend mechinical dissociation using the pipetter tips instead of trypsin during primary culture. # \, r, f% a9 O0 c5 U. T作者: wangfang 时间: 2011-10-20 21:33
