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标题: MEF状态的影响因素有哪些？ [打印本页]

作者: christophe 时间: 2011-7-3 00:24 标题: MEF状态的影响因素有哪些？

最近连续做了几批MEF，操作程序差不多，但得到的MEF状态却大不相同，有的传到P3都没问题，细胞饱满增殖旺盛；有的刚分离的p0状态都很差，细胞老化严重。请有经验的给分析一下影响MEF的状态的因素有哪些呢？怎么样才能得到状态好的MEF呢？最好从小鼠的饲养开始说起，谢了先！

作者: scottist 时间: 2011-7-6 10:20

原代培养小鼠的状态当然很重要，自己养的话比较麻烦，状态也不如公司的好，所以我都是从公司买孕鼠。上海这边斯莱克只能提供至少14天的孕鼠，南京模式动物所可以提供任意时间的孕鼠，只是运费稍有点贵，南京到上海是200.

作者: yuyan 时间: 2011-7-6 23:10

我们用的上海斯莱克的C57BL6 13.5D的孕鼠，取出来的MEF状态挺好的。P3前细胞，长的都很快。冻存复苏后也没问题。

作者: bb6120 时间: 2011-7-8 13:35

我们的都是自己饲养的老鼠，一般孕鼠要选择一些年轻有活力的！老鼠的饲养都是大同小异的。一般不要打乱老鼠的正常生活规律就OK了。

作者: sdjjfangfang 时间: 2011-7-10 10:03

我觉得首先是和小鼠本身有关系，我们分的MEF，虽然都是同一天的，但是小胚胎的数量、大小都不一样的。还有就是酶消化的时间，千万别消化过了。培养基最好是新鲜配置的。还有就是要注意掌握传代的时间。

作者: christophe 时间: 2011-7-10 15:14

回复 sdjjfangfang 的帖子5 u: B7 i! Q$ p9 v) Z$ r( ~

我是0.25的trypsin/EDTA消化15分钟，中间摇晃混匀一下，这样不过吧？我看到一些文献中是0.1的trypsin消化30min。

作者: sdjjfangfang 时间: 2011-7-12 15:39

回复 christophe 的帖子
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这样消化应该是没有问题的，那就考虑一下其他方面的问题吧

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