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标题: 急求软骨细胞诱导液的配置 [打印本页]

作者: wang6806566 时间: 2011-7-6 22:21 标题: 急求软骨细胞诱导液的配置

各位同仁，我是要做间充质干细胞诱导为软骨细胞，依据文献：TGF-β1 10ng/ml，地塞米松 1*10-7mol//l，胰岛素6.25ug/ml，转铁蛋白6.25ug/ml，维生素C 50ug/ml。可买来的试剂都是粉剂，TGF-β1 1ug，地塞米松磷酸钠2mg/1ml，胰岛素25mg，维生素C 25g 。不知道如何配置上述溶液。溶剂用什么？储存浓度多少？
急求啊！！

作者: grape 时间: 2011-7-7 01:21

本帖最后由 grape 于 2011-7-7 01:25 编辑
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回复 wang6806566 的帖子9 P) R( \! B! K3 d x4 _
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TGF-β1 溶液的配制方法及说明：% J* b" z: G6 u- n
（以下配制方法来自TGF-β1厂家答疑，本人解释总结了一下，仅供参考）：
1、先配制10mM（即10mmol/L）的柠檬酸溶液：6 B3 x2 m) c# F
柠檬酸为常用的粉末状化学品，可根据您所有的柠檬酸分子量进行计算(注意看您的是无水的，还是结合水的，分子量是不同的，一水柠檬酸分子量：210.14；无水柠檬酸分子量：192.14)，称出一定量的柠檬酸，然后用双蒸水溶解、定量到一定体积，成为终浓度为10mM的柠檬酸溶液。! b% a- n4 W8 P2 y: e: Y) ?+ M
通常10mM柠檬酸的pH值即为3.0左右，无需调节。不过最好用pH计或pH试纸测一下，如偏差很大，用NaOH进行调节。此外，在用该柠檬酸溶液溶解细胞因子冻干粉前一定要滤过除菌，因为溶解后是不能再进行滤过处理的，否则细胞因子大多会粘在滤膜上，损失很大。 3 A/ I1 K4 k; a

注：M即mol/L（摩尔浓度），M是浓度单位。1M=1mol/L，1mM=1mmol/L。# D) V6 V$ Z5 D
M与mg/L（质量/体积浓度）的换算方法：
1M=该溶质的分子量•1mg/L；
1mg/L=1M/该溶质的分子量。

配制实例：) A# n$ d) Y5 I
取一水柠檬酸粉剂1.0507克溶于50ml双蒸水，从中取1ml柠檬酸溶液与9ml双蒸水混合，测定/调节pH，过滤。
注释：欲配制10mM浓度的柠檬酸溶液，已知一水柠檬酸分子量为210.14，如配制50ml备用，即：2 C+ X3 x0 r3 J( P8 U6 E0 Y2 c
?mg/0.05L=10mM / (210.14 • 10)
？= 0.10507mg
即取0.10507克一水柠檬酸溶于50ml双蒸水即得10mM浓度的柠檬酸溶液;
为了称量方便，可以先称量一水柠檬酸粉剂1.0507克，溶于50ml双蒸水，
再从中取1ml柠檬酸溶液与9ml双蒸水混合，所得10mM浓度不变。

2、用10mM（pH值3.0）的柠檬酸将TGF-β1冻干粉重悬至0.1-1.0mg/ml。
注意一定要在此浓度范围内，否则蛋白活性不会完全恢复；% w+ w% Y9 [) x& a) u! n5 Q
3、然后立即用含0.1%的BSA溶液(此为缓冲液，如PBS等)或含10%FBS(小牛血清)的完全培养液将重悬过的蛋白溶液进一步稀释到一定的浓度（您的工作浓度）。特别注意的是，在用柠檬酸重悬后，一定要立即用BSA或FBS溶液进行稀释，否则因TGF-β1蛋白的吸附性极强，很快会粘附在溶解TGF-β1所用管的管壁上。+ a) }9 u( y, O) i% H* o

保存条件：如果短期用，则一般置于2-8℃，活性可维持一周左右；
如长期保存，则需分装冻存于-20℃— -80℃，至少有一年以上的效期。

再仔细阅读一下相关试剂的说明书。, O6 t+ E' _. ~+ W( e2 y. N% C" {
其他试剂用双蒸水配制应该就可以了。

作者: qiqishichaoren 时间: 2011-7-12 11:08

我们是用PBS去配的，比如胰岛素25mg，量已经很少了，而且为避免污染，不能再经过称量，要直接全部溶解掉。由于最终浓度为6.25ug/ml。则要用0.4ml 、 4ml或40ml去稀释，配制的浓度就相应的分别是6.25X104 ug/ml、6.25X103 ug/ml或6.25X102ug/ml，然后根据你自己的培养液浓度相应加进去。建议用40ml去稀释,之后配100ml 培养液就直接取1ml就可以了。很方便的。

作者: myx142 时间: 2014-2-25 21:45

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你好，我也要做软骨细胞诱导分化，请问你是用的什么培养方法呢？在细胞瓶二维培养吗？谢谢！

作者: 细胞海洋 时间: 2014-2-26 09:06

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