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标题: 培养的肿瘤球不是球，而是团片状！ [打印本页]

作者: conanthird 时间: 2011-7-8 10:59 标题: 培养的肿瘤球不是球，而是团片状！

肿瘤干细胞，无血清，添加生长因子，低粘附的板子。培养5d的图片。2w的结果也类似。请大家帮忙分析一下，结果正常否？原因何在？非常感谢！

作者: WAX 时间: 2011-7-8 14:03

图片！

作者: 山羊 时间: 2011-7-8 16:25

5d？也太快了吧，我们实验室有人养乳腺癌干细胞最快也要一个星期
图片呢？

作者: 丁子 时间: 2011-7-8 21:05

有两种可能，一是这种漂浮的细胞团只是一般细胞的简单聚集在一起，二种可能就是肿瘤细胞球就聚集在这些细胞团中，因为漂浮的细胞会聚集在一起，就算成球了，也会聚集在一起。鉴别的方法：可以吸取其中一孔的细胞，轻轻吹打，离心重新加入新的培养基中，观察看有没有球。如果全是单个的细胞，则没有成球。

作者: amosummer 时间: 2011-7-11 14:48

有些时候，细胞培养久了感觉也会像是细胞团而不是细胞球。细胞球的折光率会比较高，球形也会比较规则。还得看看成球的大小，如果有文献报道过的，看是不是相差太多。如果相差很多，说明可能是聚集而成的细胞团。按楼上的说法，先吹散，再传到其他孔内，观察成球情况。

作者: conanthird 时间: 2011-7-11 17:01

本帖最后由 conanthird 于 2011-7-11 17:10 编辑 9 S& g* R4 o* A

非常感谢楼上各位的分析。前几天由于电脑没装PS，没法将图片缩小。故未上传。
图片分别是三株不同的细胞株。放大倍数都是50倍。培养的时间分别是8d，5d和2w。除了中间那株细胞外，另外几株细胞培养两周都如第一张图片所示的团块状。偶尔能发现如第三张图片似得球状。细胞在显微镜下观察，折光率很高，不是死细胞团。而且，我细胞接种密度很低，6孔板，每孔大概3万左右。且接种的前几天，细胞都很分散，最多能见到十几个细胞聚集成的团，应该不是接种时未吹散所致。

作者: jitianxing7021 时间: 2011-7-11 19:21

你接种的太密了！应该减少细胞数量！

作者: aminhair 时间: 2011-7-11 20:05

细胞在显微镜下观察，折光率很高，不是死细胞团。# ?8 ^ k7 S' D6 E* ~* P
这一条怎么解释？" o! S, t6 j/ z% `; ?

作者: monk125 时间: 2011-7-11 20:26

恩看这样子你还得等一段时间，现在都是些正常的肿瘤细胞因不能贴壁而团聚在一起，根本不是CSC细胞，你这得等一段时间，淘汰选择出CSC。不同细胞系成sphere的时间不一样，你现在可以摸索下条件，另外建议降低细胞密度!!!!! 不然即使存在CSC细胞，也会因细胞团聚在一起，位于中间的细胞得不到营养而凋亡。。。。。。。CSC细胞所占的比例很小，，，，，所以你镜下看到的肯定不是你想要的

作者: conanthird 时间: 2011-7-13 15:28

谢谢大家的分析。关于接种的细胞数量，我是这样考虑的：按照肿瘤细胞系中肿瘤干细胞的比率为0.1%，我在六孔板里，每孔接种3万细胞，那具有成球能力的细胞也只有30个而已，最后形成的球也只有30个左右。这样算来，接种密度并不高。

作者: shen_coco 时间: 2011-7-14 15:44

回复 conanthird 的帖子& s6 m: G) x: l4 o& w! S6 t" m& `- p
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一般文献都是用5000/ML或者2000/ml 接种，不知道你用的是什么细胞系啊，有的细胞系确实不能长成球，而有的细胞系很容易长成球

作者: ycjzyh 时间: 2011-7-15 03:04

个人感觉并不是细胞球，耐心等待一段时间吧，我现在已经等了快两个月了....心焦的不行啊~

作者: lsp_318 时间: 2011-7-16 10:56

我培养的细胞一开始也是这种状态，大概一个星期左右就能渐渐形成细胞球，跟第三张图片类似，但是细胞传代效果不佳，不知道什么原因。有时间交流一下。。。

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