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标题: 为啥iPS培养液体黄的这么快？ [打印本页]

作者: dilal 时间: 2011-7-11 09:35 标题: 为啥iPS培养液体黄的这么快？

最近养小鼠的iPS细胞，饲养层培养，培养液用的是血清替代物配制（Knockout SR）的培养基（都是iPS细胞专用的），但是传代后不到一天液体就变黄了，换完液后半天再去看，液体又变黄了。镜下看iPS细胞长的也并不是很明显，怀疑跟孵箱有关，换了孵箱养结果一样。
一直搞不懂是怎么回事？细胞长得也不是很快，为啥液体老是变黄？请高人指点。

作者: fananran2003 时间: 2011-7-11 09:39

你培养液是不是用的knock-out DMEM F12,

作者: bunny19870512 时间: 2011-7-11 10:01

测下PH？

作者: 微微一笑 时间: 2011-7-11 10:06

一、可能是污染。
二、培养箱用了多久，最近有没有调校。我们实验室之前一个培养箱就是这种情况，设置5%CO2，显示也是5%CO2，但是工程师后面来测时发现实际CO2是2.8%。
三、DMEM F12如果没有调过PH，而直接配出来的培养液是偏酸性的。

作者: hygene 时间: 2011-7-11 10:19

1、测/调PH值；6 l, r/ k3 J7 c5 B3 g. t
2、考虑支原体污染，如果是那就趁早重来吧。

作者: dilal 时间: 2011-7-11 12:09

回复 fananran2003 的帖子" P8 {! S/ D( `3 p; R2 B8 ~
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是Knockout DMEM

作者: dilal 时间: 2011-7-11 12:09

回复 bunny19870512 的帖子
1 ^. s7 @+ q( C, {/ s, |( x
测过PH值，7.0

作者: dilal 时间: 2011-7-11 12:11

回复微微一笑的帖子+ G; p+ f* S. m7 Z+ y+ a
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不是污染的问题，仅仅是液体变黄，也不浑浊，而且镜下细胞状态不错，没有发现有污染的迹象。

作者: cicadacjk 时间: 2011-7-11 12:12

knock out serum replacement配的培养基在co2中平衡后就是黄色的，你估计加了15%，放一会应该就黄了。

作者: dilal 时间: 2011-7-11 12:20

回复 cicadacjk 的帖子/ D7 w. {1 y% N4 F, m& s

是的，我们配制的浓度是15%，按照广州生物医药与健康研究所提供的配方配制的，细胞也是在他们那里买的。但是有一点特别怪，我们用这种液体养ESC细胞时（没有饲养层），液体也不变黄，但是养iPS细胞时就变黄。不知道你们有没有出现这种情况，原因在哪里？

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-7-11 12:27

可能是支原体污染……

作者: cypan 时间: 2011-7-11 12:28

基于你描述的情况：
建议3点：
1、检查一下培养液本身PH值：
一般情况下，我们所用的培养液pH介于7.2～7.4之间；加入细胞后随着细胞生长时间的延长，细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降，引起颜色变浅变黄。但是，我记得Knockout SR本身就是黄色的，所以你需要确认一下培养液添加前后颜色变化的幅度，分别都测一下PH值。0 `' V: [% R4 ^4 ]8 `. ?

2、测一下培养箱CO2浓度；
3、作个对照试验，检查一下你的饲养层细胞。) o3 a( R6 j9 O% N) s! [
希望对你有所帮助.

作者: fananran2003 时间: 2011-7-11 23:47

应该不是什么问题，Knockout DMEMF12颜色本来就有点偏黄，加上血清也是黄色的，所以你的培养液陪完后整体就是有些发黄的，所以只要细胞没什么问题就说明你的培养液正常，观点同9楼，该培养液陪完平衡一会就是黄的，放入培养箱后黄色更显。别担心哈！

作者: ly200101042 时间: 2011-7-12 10:28

我用D/F12加20%KSR配完了就很黄我做过测试都没有问题应该是是D/F12的颜色的问题

作者: dilal 时间: 2011-7-13 09:44

回复 fananran2003 的帖子# q5 r: P# _* g# j5 E

谢谢，还担心了好一段时间，怕液体太黄了，影响细胞状态

作者: yangpan521 时间: 2011-7-14 19:44

我也在养小鼠的IPS细胞，用的是进口ＦＢＳ血清，浓度１５％，培养液也是容易变黄，但是没有你说的黄那么快，一般是一天就变黄了，ＩＰＳ长的很快，一般两天就必须传代了。另外，你用的是ＫＳＲ，配出来的培养液本身也偏黄，建议多加点培养液。

作者: wangyimei 时间: 2011-7-26 00:21

是不是因为feeder cells 也在消耗培养液，也在产生酸性的代谢产物，所以会黄的很快，再说，我配好的液体本来就是偏黄的呀

作者: dilal 时间: 2011-7-26 08:58

最近在一个干细胞培养手册上看到了相关解释，KSR配制的培养基本身就有些偏黄，iPS培养后的确很容易变黄，属于正常现象。最近将iPS细胞和ESC细胞对比了一下，发现iPS细胞的确长得很快，一般一天就变黄了。

作者: dilal 时间: 2011-7-26 08:59

最近在一个干细胞培养手册上看到了相关解释，KSR配制的培养基本身就有些偏黄，iPS培养后的确很容易变黄，属于正常现象。最近将iPS细胞和ESC细胞对比了一下，发现iPS细胞的确长得很快，一般一天就变黄了。

作者: wangyimei 时间: 2011-7-26 09:56

培养ES cell加有feeder cells ，feedrer cell 本身也会消耗培养液，产生酸性的代谢产物，使其颜色变黄；' a" S; O! S4 a8 |9 l' l3 F
再说，我配好的human ES 培养液本身的颜色就是偏黄的啊

作者: xq1205 时间: 2011-7-26 22:39

在400倍镜下如果如果看不到细菌，应该就没有污染。如果使用KSR培养iPS，再加上培养液中的NEAA，一天之后变黄，很正常。iPS耗能很快，不能超过一天换液，密度不要太大。小鼠的iPS建系时使用KSR比较好，在后期的培养中使用胎牛血清比较好，嵌合体效率高。有文献发表，可查阅。

作者: wangyimei 时间: 2011-8-1 23:51

饲养层细胞也在消耗代谢产生出酸性代谢产物，会使培养液颜色变黄，仔细观察一下是不是饲养层细胞没有有效的抑制其分裂还在生长？

作者: song1978 时间: 2011-8-3 12:07

1、feeder的密度，接种的细胞是多少？两者均不宜过密, G) e! ?; I' K" A4 O
2、KSR/DF12还是FBE/DMEM？前者本身就会发黄

作者: dilal 时间: 2011-8-4 09:39

已经证实了是KSR培养基自身的特性，我抽了一点培养基到离心管中，放入孵箱孵育，第二天去看液体就变成黄色的了。不过iPS对于培养基的消耗的确比较大，不知道是什么原因。

作者: iyaofying888 时间: 2011-9-1 16:09

估计是支原体污染的，我以前遇到过，支原体污染你看不到培养基浑浊的，会从细胞的状态看出来的，你做一下PCR吧

作者: 遗云射月 时间: 2011-9-2 16:33

大家好我也养小鼠ips 每次上饲养层之后就污染不知道什么原因了求教啊

作者: dilal 时间: 2011-9-2 17:06

回复遗云射月的帖子
: F; d6 i) `" T. j( B2 z
建议查饲养层，最常见的是动物源性的支原体污染。

作者: sarah19860420 时间: 2011-11-11 23:17

回复 xq1205 的帖子

求您所说的这篇文献，可以吗，嘿嘿，可以告诉名字即可。多谢啦。

作者: yangpan521 时间: 2011-11-12 09:23

dilal 发表于 2011-7-11 12:20
& U* `; ?, M4 O" C/ a! W回复 cicadacjk 的帖子' d% V% H; U' O6 B
, \# l6 X0 {; _* a! S
是的，我们配制的浓度是15%，按照广州生物医药与健康研究所提供的配方配制的，细胞 ...

有意思，值得关注

作者: yangpan521 时间: 2011-11-12 09:24

dilal 发表于 2011-7-11 12:20 7 O$ w5 {' F( m9 w7 v
回复 cicadacjk 的帖子
# K5 b3 z+ C1 y' F' L& Q! v- x7 {( x+ N5 `4 K* }& ^# y+ @
是的，我们配制的浓度是15%，按照广州生物医药与健康研究所提供的配方配制的，细胞 ...

值得关注

作者: shylook 时间: 2011-11-12 09:42

加heps

作者: ly200101042 时间: 2011-11-14 13:12

我养的iPS也很快就黄了，但是我做条件培养基的时候，把培养基放到MEF孔里就没有黄的那么快。个人觉得应该是细胞分泌的，导致变黄。

作者: ilovelife 时间: 2011-11-15 05:26

我们实验室养的mouse iPS, 一般也是每隔天换液, 因为iPS细胞本省和feeder都在改变培养环境啊.

作者: wangyimei 时间: 2011-12-5 12:54

那个液体本来颜色就是偏黄的，各种试剂成分及浓度只要是正确的，不用太纠结这个颜色吧

作者: 白巧克力 时间: 2011-12-5 13:12

培养基本来就是黄色的啊。。。

作者: znbr044 时间: 2011-12-5 14:24

回复 dilal 的帖子. G& u, f9 G. K! }9 q- N
" X2 o7 H& O8 R: ?
就是黄的，不用担心，你用的是KO的DMEM +KSR吧，就这样，么事

作者: gaoyuanwind 时间: 2012-2-19 00:44

回复 dilal 的帖子 |* E+ a9 h# S2 m. p

能不能推荐一下仁兄所以用的干细胞培养手册的名字啊？:handshake

作者: hansey 时间: 2012-2-21 15:52

是不是因为iPS细胞比较多，再加上有MEFs，营养消耗比较大，所以培养基出现黄色？？

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