干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: DNA为什么不溶解了？ [打印本页]

作者: idealgas 时间: 2011-7-14 18:28 标题: DNA为什么不溶解了？

本人前段时间为了浓缩质粒DNA，将浓度为300ng/μl的500μl质粒（溶剂为ddH2O），加入2.5倍体积的-20℃预冷的无水乙醇，混匀后，放入-20℃冷藏40min，13200rpm离心20min，然后弃上清，用-20℃预冷的70%乙醇400μl清洗一次，弃上清，沉淀为白色，晾干30-40min，晾干后为无色，用100μl ddH2O 回溶，结果无法溶解。不知为何，不知道有没有童鞋碰见类似的情况？敢情高人前来解答。另外整个过程怎么想也不可能出现蛋白质污染啊，所以沉淀应该不是蛋白质。不知为什么这东西就不给溶解了。同样提的其他质粒就能很好地溶解，而且是平行做的实验。不知道是不是因为什么情况？还是DNA也有不溶解的情况啊？如果有的话，还请列出什么情况下DNA不能溶解，大家共同探讨学习嘛~~谢谢。

作者: jiojoo 时间: 2011-7-14 20:04

是否是晾的太干了，如果干燥过度，DNA是会比较难溶解的

作者: langziforever 时间: 2011-7-14 21:10

楼上的回答很准确，提DNA或RNA时不要晾的过干，否则会无法溶解！

作者: 殆死悲爱 时间: 2011-7-14 22:49

凉得时间太长，只要乙醇挥发了就可以溶了，一般会过夜，也可以56℃溶解

作者: rain2402 时间: 2011-7-15 08:35

应该是晾过度了。只要乙醇挥发没了就可以溶解了。你现在试试在50度左右的水浴中溶解试下。

作者: dahui 时间: 2011-7-15 08:53

一方面：离心速度过大，一般10000,10min就足够了。
另外，如果实验是这个季节做的话，不知道你有没有空调室内，现在室温也很高，你直接空气干燥30~40min的话，不觉得时间很长吗？0 X& q) q, D Q7 h) T
你的质粒总量也就150微克，总量不是很大，所以空气干燥时间太长，还有就是你说的其他质粒是什么意思？平行又是什么意思？有没有分析平行之间的操作差别。' y7 y% s8 {: ~ M
解决的方法首先可以尝试楼上说的，用50~56度水浴助溶，或者可以换TE buffer溶解试试看。

作者: 王乾 时间: 2011-7-15 10:15

晾干的时间太长，DNA过分干燥之后基本溶不了。你其实晾干3-5分钟就行，酒精很容易挥发的，在抽提基因组DNA的时候我一般晾干不超过15秒，否则明显难溶，甚至在4度放一个月都没溶。

作者: bllx58 时间: 2011-7-15 10:19

晾得时间确实太长了

水浴可以尝试，或者推荐4度过夜溶解，楼主可以试试我的方法，可能有效

作者: aminhair 时间: 2011-7-15 10:36

回复 dahui 的帖子( U5 _! _. q: c( [4 s

参考dahui的回复吧！说的很全面！

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)