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标题: 求助：成纤维干细胞原代培养 [打印本页]

作者: OBGYNob 时间: 2011-7-19 20:44 标题: 求助：成纤维干细胞原代培养

不做实验不知道，一做实验吓一跳！原来自己真的什么都不懂....2 c$ g% D" `. a0 u; ]$ i5 W1 ?2 y) e9 w2 G
最近师傅又打算让我做成纤维细胞的培养，再做成iPSCs...打算用体表疤痕做材料，查看文献上说：可以用0.25%胰酶37℃消化30min以分离表皮与真皮。但是我消化之后表皮还是很难分离开啊，而且下面的真皮层好像不是文献上说的可以剪成0.5mm碎块，而是一坨...没办法很好的接种在培养瓶上啊{:3_60:} . L) b1 E( o3 H4 u* y4 ? m9 n/ T
请教各位高手，真皮层消化之后是变成一坨还是真的可以剪成很好的碎块？

作者: dwl1209 时间: 2011-7-20 08:54

建议看看国外相关文献的做法

作者: 懵懂干细胞 时间: 2011-7-20 08:59

干细胞之家有很多这方面的帖子！你自己找找

作者: 蓝O海 时间: 2011-7-20 10:04

真皮剪了以后再用胰酶消化，看上去是一坨东西，但是只要你真的把它剪碎了的话，用培养基吹打一下他就会分开的。如果没分开那有可能就是没有剪彻底的原因。祝你实验顺利。:)

作者: OBGYNob 时间: 2011-7-20 18:24

回复蓝O海的帖子

{:3_59:} 3Q.....

作者: OBGYNob 时间: 2011-7-27 09:45

宣告失败！！！！！

作者: ziluo11 时间: 2011-8-10 16:39

建议再查查文献，确定胰酶没有问题吧，再调整一下消化条件，比如时间什么的，不知道对不对，可以试试，祝你成功！

作者: OBGYNob 时间: 2011-8-11 09:36

再次尝试组织块贴壁法+胰酶消化法，结果期待中...{:3_58:}

作者: baiyunrui 时间: 2011-9-7 21:42

我认为你可以把胰酶换成胶原酶，你那种情况我也遇到过，最后放弃了胰酶。并且胰酶对细胞损伤较大

作者: lh_kitty 时间: 2011-9-7 22:42

换一把好的剪子

作者: alicia_86 时间: 2015-5-18 11:08

胶原酶消化能力太强了，还是胰酶好一些

作者: chenlin080102 时间: 2015-5-18 11:36

建议用胶原酶，我之前也是使用胰酶的效果也不好，换用胶原酶效果更好

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