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标题: 免疫荧光染色用PBS和TBS有无区别 [打印本页]
作者: 深海鱼    时间: 2011-7-28 10:33     标题: 免疫荧光染色用PBS和TBS有无区别

做细胞的免疫荧光染色，有用PBS有用TBS的，二者都是缓冲液，不知有啥区别，哪个更好一点？另外PBS必须是细胞培养的PBS吗？自己配制可不可以，会影响结果吗？请各位大侠不吝赐教，感激不尽
作者: menghy    时间: 2011-7-28 11:07

我个人认为PBS还是要好一些，因为TBS里面含有HCL对实验肯能会有一些影响。做免疫荧光的话一般自己实验室配制的PBS就可以，细胞培养级别就是纯度更高一些，你用分析纯的试剂配制PBS完全可以满足实验的需要了！
作者: 深海鱼    时间: 2011-7-28 11:25

回复 menghy 的帖子
3 ~9 u& L  v4 x. [7 S* ]! c! @+ N, {6 v( w  i8 a5 ?
谢谢大侠指教
' }! M$ F! O6 K4 _不过网上PBS的配制方法有很多，难以取舍，大侠能否告知您的配方？
作者: oucflora    时间: 2011-7-28 11:42

细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我也是用的超纯水，给你一个配方：+ ?6 r* {6 S  L9 `% f3 G
KCl                          0.2g/L' g9 e, n+ |! n$ K$ o* M" _
KH2PO4                  0.2g/L
0 R: V" b$ f; v$ CNaCl                        8.0g/L3 l: ^( f$ X* l% j$ G. Z; M, b( ~
Na2HPO4.7H2O      2.16g/L+ S, y" `  j, a' F: k2 H
用超纯水定容到1L 即可；最好是现用现配，4摄氏度保存。
4 g, }( [( X3 B6 V* P% I2 P' V* T, B# c4 ]" s+ E* r
  
作者: oucflora    时间: 2011-7-28 11:44

以上配方中所列的试剂用国产的分析纯即可。如果没有超纯水，也可以用三蒸水代替。
作者: linlicau    时间: 2011-7-28 11:45

没什么区别。
2 h5 U" T0 U7 ]2 w3 |4 t8 p, n! b. ?: n- U9 {- y; `+ {
PBST和TBST的区别一般在做磷酸化实验的过程中要用TBST，因为PBST有磷酸，会影响结果。
0 _- S2 V3 A& x6 y+ {+ Z+ b0 l4 l3 q+ T1 K* W# g) g0 [6 N0 V4 m+ g, \
Immunostaining用什么都无所谓。' J! U4 K/ b2 }* y9 r: P

( \5 R* N8 d4 p+ CPBS配方：' H* C2 q: {: p! C; D& J
http://www.ihcworld.com/_protocols/washing_buffers/pbs.htm
作者: oucflora    时间: 2011-7-28 12:17

本帖最后由 oucflora 于 2011-7-28 12:42 编辑
/ c" ^: m. N% W2 C# e$ ]
oucflora 发表于 2011-7-28 11:42 & |6 A. R3 f/ Q' S
细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...
) W- c4 |  N8 }. A

" \! t+ u% F0 T5 Y3 A其实关于PBS的配方问题我以前查阅过很多资料，不过在刘爱平主编的《细胞生物学荧光技术原理和技术》（中科大出版社出版）这本书中介绍说PB（phosphate buffer）为磷酸缓冲溶液，只有Na2HPO4和NaH2PO4两种成分。而PBS（phosphate buffered saline）称为磷酸缓冲生理盐水，是在PB的基础上添加了NaCl等成分。" b' a5 u, E' B3 O$ n2 h
在PB和PBS的选择上，个人认为对于活细胞的漂洗工作最好用PBS，细胞被固定后就没有太多的要求了。* K* Q, b: M  a% J
上面我列举的PBS的配方来源于薛庆善的《体外培养原理与技术》这本书。咱们论坛有电子版，下载地址：http://www.stemcell8.cn/thread-36261-1-1.html
作者: menghy    时间: 2011-7-28 16:13

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42 2 X$ K7 z+ t% T3 v9 H% p/ n
细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

9 [7 H. A! F' Y. l% z  T7 S7 i我们PBS的配方和这位坛友的是一样的！后面有事情就没有来得及回，不好意思！
作者: ljs    时间: 2011-7-28 16:58

回复 linlicau 的帖子
: r$ ]' g6 q) i; A2 t! X3 M
! ~1 B' e% A( x! z) g0 IPBST中的T是什么意思？
作者: linlicau    时间: 2011-7-28 17:39

ljs 发表于 2011-7-28 16:58 3 A, t) D0 l9 d4 E( \- m- U9 T. x; ]
回复 linlicau 的帖子+ J6 {$ G  X2 `. S, q
3 z$ `( K2 A0 b, f4 L4 G
PBST中的T是什么意思？

" o/ x# e1 s& I! ]( t  l你在洗的时候不是用PBS或者TBS洗，而是使用加了Tween-20的PBS或者TBS洗。一般一升的PBS/TBS加1ml Tween-20。充分摇匀后使用。
作者: eley    时间: 2011-7-28 20:02

回复 ljs 的帖子$ B1 \& o# i; V% c/ {0 ?
* a/ W( d7 j8 a
Tween-20啊，TBST也是这个
作者: 深海鱼    时间: 2011-7-29 11:12

回复 oucflora 的帖子& M3 i, f& B1 h6 q. W
( h4 |; k- L( P. L' y
谢谢指教~ 受用了~
作者: 深海鱼    时间: 2011-7-29 11:15

回复 menghy 的帖子
$ G4 W" K' X& ^/ m
- F' ]! ]: b) X% Y3 Z9 i我照着这个配方试试，谢谢啦~
作者: 深海鱼    时间: 2011-7-29 11:18

回复 linlicau 的帖子- c  V& A8 L$ D" N

3 b" P$ A$ f: }6 u/ vTeeen-20与Triton X—100是一回事吗？我怎么觉得T指的的Triton X—100呢
作者: aminhair    时间: 2011-7-29 12:17

回复 linlicau 的帖子
9 h% x- u$ o) p" b. M
* n& s( l+ w; c- _+ c# z支持！
作者: linlicau    时间: 2011-7-29 13:12

深海鱼 发表于 2011-7-29 11:18 4 D/ ?' z- t- E; t
回复 linlicau 的帖子  e3 i' g: k% B2 X9 @( n$ f

9 L; f  o6 d$ b) HTeeen-20与Triton X—100是一回事吗？我怎么觉得T指的的Triton X—100呢
7 _8 J& c7 z1 Q) H4 U' N
http://www.ihcworld.com/_protocols/washing_buffers/pbs.htm
$ V4 ]/ K" o) b- Q! j! a8 e" m& A# b# b4 P: E; X* z. Q6 p
Tween-20是用来洗掉非特异性杂质的。6 O. T2 {1 P7 @# Q& A+ E- {" t- v
5 Y" l  ?6 t  V, c- v' C
Triton-100是用来穿膜的。
作者: 深海鱼    时间: 2011-7-29 15:33

linlicau 发表于 2011-7-29 13:12
3 C9 w- ]5 W& z( X- Fhttp://www.ihcworld.com/_protocols/washing_buffers/pbs.htm
: Y: I; }9 X/ {) R
) a- E% S1 d- `0 C' ]Tween-20是用来洗掉非特异性杂质的。
6 k$ x, R+ H6 G/ w( b
我看一个protocol上些PBS加入Triton X-100之后就是PBST了，看来我是误解了。- I( y$ d9 F5 L! E4 G7 |
另外这位老兄名字中的“cau”是农大的意思么？呵呵校友？
作者: linlicau    时间: 2011-7-29 16:01

回复 深海鱼 的帖子
9 G$ @* x. Z" }! o4 e: X7 K4 Z8 ?2 G/ ~2 p( N( H: `5 q
要千万注意，check完再配溶液。
4 |9 l1 }: ]: Y) z3 ^# ~/ {! y% a2 K8 q9 R8 y6 b
我本科时农大的，呵呵~加油！
作者: istephen    时间: 2011-7-29 17:58

本帖最后由 istephen 于 2011-7-29 17:59 编辑 ) {/ {- m4 u& T/ I! C3 f7 `

5 ]  F$ j) c3 S; I/ g) K没区别，但是PBS更温和4 g3 ]' }8 y, ~8 C' U( a
自己配的话也没问题
- |6 S) \- e, G6 C" p; B我们实验室的配方 ：）' X( q/ m6 u* L8 `
- U" o" i) A5 x  Y9 \
PBS        NaCl                            8g(137mM)
( b- Y+ u+ a1 U* J        KCl                         0.2g(2.7mM)
( R6 Y" t& J# J/ S0 R& }        Na2HPO4          1.44g(10mM)
" b# k2 u' H/ x6 E- p7 h2 H        KH2PO4                         0.24g(2mM)
# i4 ]7 I/ }/ r5 o4 s2 |$ ~: `                                  HCl adjust PH=7.46 c& x' f) u" Q5 l( h4 u
                              定容1L，高压灭菌
  f- ^6 I% j# @4 m/ }" E! y
作者: 深海鱼    时间: 2011-7-31 19:52

回复 istephen 的帖子
- u4 s8 L+ k: ?8 z  s" g- d1 X! D' A) q6 P, m- N
Thanks
作者: 深海鱼    时间: 2011-7-31 19:53

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$ [9 a( }$ {1 R6 j: c5 p- X8 N( N) m0 s6 D
那你现在在哪呢？
作者: song2086    时间: 2011-7-31 22:50

PBS和TBS效果基本一样，都是提供稳定的PH环境，自己配置的PBS只要配方正确，和买的效果一样，细胞培养的的PBS完全可以用来做免疫荧光。
作者: song2086    时间: 2011-7-31 22:56

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) x: d% l" h1 Y, i- y* K8 T8 H; u+ g( Y# i1 ^5 A9 T
T代表吐温20，加入PBS或TBS中，浓度0.2%即可，可以降低Western blot 的背景。
作者: hxf_86    时间: 2011-7-31 23:00

T 可以代表tween或者triton。
4 N  T' R* M1 S/ c, P" @& t貌似木撒差别
作者: linlicau    时间: 2011-8-1 14:22

深海鱼 发表于 2011-7-31 19:53 ' z$ v( q7 q0 y9 n8 ^4 }! D! G
回复 linlicau 的帖子
; {$ u# x& n+ n' n- u4 X5 R% M0 g, \: C( r
那你现在在哪呢？

7 n8 n* F( S3 \+ Z清华
作者: dongxin    时间: 2011-8-3 11:07

还是PBS用的比较多吧！用超纯水自己配置。



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