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标题: 胚胎干细胞感染效率低 [打印本页]

作者: ningtinglu 时间: 2011-7-28 16:53 标题: 胚胎干细胞感染效率低

为什么用逆转录病毒感染ESC的效率这么低啊？上次包毒用GFP作control基本没有克隆绿。。。。听说慢病毒的效率要高一些。各位大侠给解释一下原理，谢谢

作者: christophe 时间: 2011-7-29 08:19

回复 ningtinglu 的帖子* X: L- c% v, M3 x; Y1 V& R* D& x
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逆转录病毒转导ES的话，一般会有一个转录沉默现象，所以你的目的基因表达不了。看到有的公司推出MMLV区域突变了的retroviral表达载体，说可以在ES中高表达，但没试过。一般都是用lentivirus或者电转和脂质体的方法。另外慢病毒感染mES需要注意的几点是：
1、用病毒的话需要高速离心浓缩一下病毒，感染293T测一下病毒滴度，感染mES一般MOI值要高于50." I: ]0 t; |4 |& t9 U6 O/ |" g
2、启动子不要用CMV的，用EF-1a的会好很多。其他CAG PGK MSCV的都要比CMV的在ES当中启动效率要高。

作者: zm19900508 时间: 2014-6-30 14:39

回复 christophe 的帖子# V1 f4 ^" y( \( X* c

请问关于MMLV区域突变了的retroviral的具体信息，比如全称，公司等。多谢啦

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