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标题: 求助：原始生殖干细胞的传代方法 [打印本页]
作者: majing217    时间: 2011-7-30 09:42     标题: 求助：原始生殖干细胞的传代方法

我目前在养原始生殖干细胞，但是对于原始生殖干细胞的传代方法一直没找到好的方法，想求助与各位前辈，有没有好的传代方法交流一下。谢谢
作者: aminhair    时间: 2011-7-30 14:17

作者: linlicau    时间: 2011-7-30 15:05

majing217 发表于 2011-7-30 09:42 5 v/ y% M5 ~. l/ Q
我目前在养原始生殖干细胞，但是对于原始生殖干细胞的传代方法一直没找到好的方法，想求助与各位前辈，有没 ...

/ i+ {" D) Y. k5 z2 w# @- L+ v小鼠的还是人的？
作者: 细胞海洋    时间: 2011-7-31 21:23

回复 majing217 的帖子
7 F# I* R* Z4 m' O& i
! |% p, {3 N) U$ R. [* L具体先说说你的方法
作者: majing217    时间: 2011-8-3 18:53

回复 linlicau 的帖子( G9 \5 t0 L6 Q0 C# b( t1 ]8 ^
- s6 e6 z0 Y5 W; \  v0 Z6 V1 W0 r( U
是猪的9 Y3 [" w9 m2 T# `8 [3 o) }+ j
作者: majing217    时间: 2011-8-3 18:54

回复 细胞海洋 的帖子
) S  {- e  p6 X, l3 c& _3 _# ]9 _
就是胰酶消化法，但是不离心，直接接种
作者: linlicau    时间: 2011-8-3 20:37

majing217 发表于 2011-8-3 18:53
/ o0 _0 d5 B; J! h6 @1 z6 j回复 linlicau 的帖子7 {  n# k2 M' T. b
' N: @! R3 i( g; ^9 N8 Q
是猪的

! n. n* A$ j3 s5 P+ ]7 Q( t这个不了解。
作者: yangpan521    时间: 2011-8-24 08:34

请问你的原始生殖干细胞是怎样获得的 ，请求具体步骤，先谢谢了
作者: majing217    时间: 2011-8-24 09:25

回复 yangpan521 的帖子
; w& k; D1 c& ^; J' J0 W) |4 Y! a: V  M
就是剥离生殖嵴，用酶消化法培养
作者: yangpan521    时间: 2011-8-24 09:32

我也做过，剥离后，直接用胰酶消化，长了4,5天才有几个小克隆出现，然后就传代，可是结果是传没了，不知你是用胰酶呢，还是胶原酶，我都试过了 不好用
( l: p, W* s& a& G  G
作者: majing217    时间: 2011-8-26 08:21

回复 yangpan521 的帖子
/ c$ o  T0 {  @; a1 e8 I
" X) V0 J$ l& w' \2 @8 H原代的时候我用的是胰酶，之后传代我也出现过你的问题，克隆长不大，而且数量越来越少，而且传代在饲养层上，饲养层大量死亡，我现在也在找原因，希望多交流。我试着传代的方法有两种，一种是胰酶直接消化，另一种是挑克隆，效果都不好。
作者: hxw123    时间: 2011-8-31 09:25

传代时，用收集到的培养生殖腺细胞培养液与培养生殖干细胞的培养液混合后进行培养。
作者: yuanyan2010    时间: 2011-8-31 09:35

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! m4 b6 I: M4 ~/ N& ^  o  y, K% I9 Z
多少天的生殖嵴，还有就是培养液能说下子吗
作者: yuanyan2010    时间: 2011-8-31 09:38

回复 yangpan521 的帖子
( l3 `. Y5 B, j; K& V
6 y3 P4 M& |  n  M1.会不会培养液不适合，细胞分化了 2 .体细胞增殖比PGC快，增殖抑制了呢。我也想做的，也没成功，考虑把小克隆给挑出来养养看呢
作者: yangpan521    时间: 2011-8-31 16:30

回复 yuanyan2010 的帖子
0 [! Z5 r6 }; y" T: V+ X6 }1 @( R
% [7 T/ }7 ?! ?. M( l" y12.5天的生殖脊，培养液是干细胞培养液+ＧＤＮＦ（不只是什么东东，是老板给的，具体也没查到）
作者: jhu132llh    时间: 2011-8-31 17:09

回复 yangpan521 的帖子& ]& e. x( l! N) |8 G5 b( U

, f9 U  t7 ^* F- K9 h0 jＧＤＮＦ是神经生长因子
作者: majing217    时间: 2011-9-22 13:04

回复 yuanyan2010 的帖子: M9 A! g  \. b( A# B
4 \: J" b# m8 @7 e* g3 u+ A7 e
我做的是猪的原始生殖细胞，现在取的是26天的胚胎，培养液是正常干细胞的培养液，但是没有加bFGF。
作者: majing217    时间: 2011-9-22 13:06

回复 yangpan521 的帖子9 U1 o1 v# d8 |5 u
3 w3 g- i; _9 t' d8 b8 ^4 j
那你用这个培养液养出来的原始生殖干细胞状态怎么样?那个神经生长因子起得是什么作用啊？再就是你的干细胞培养液中加了多少量的bFGF?3 w; n" p3 u7 b; z: F7 c
作者: ellapan    时间: 2011-11-3 00:44

个人看法，一是你的细胞浓度太低的话会导致克隆在生长和传代时逐渐萎缩而消失，二是你传代时怎么还要用酶消化那？不知是否有误？ 三是你的培养液的成分不适合干细胞的增殖，进而分化了。 可否就你的具体培养液和方法展示出来，这样大家也好有个参考！！
作者: ellapan    时间: 2011-11-3 00:45

哦 你是分离生殖干细胞时采用酶消化， 就猪的而言可否尝试针刺释放哪？- p) P6 ?# z% P1 h0 |5 E
作者: majing217    时间: 2011-11-3 07:30

这个我没有尝试过  K, f: T( ]  X. b! o0 r/ [( i# C
作者: hcluo    时间: 2011-11-3 16:10

一般5-7天传代吧，不要太频繁，另外，如果养成细胞系了，一般传完以后后长起来的，如果不是株系就很难说了。
作者: houbara    时间: 2011-12-13 18:36

原是生殖细胞能不能在体外长期培养，不转化为eg



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