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标题: 第一篇CIK细胞的描述 [打印本页]

作者: deron 时间: 2011-8-1 22:01 标题: 第一篇CIK细胞的描述

主题：用SCID小鼠/人的淋巴瘤模型评估具有强效抗肿瘤细胞活性的细胞因子诱导杀伤性细胞

说明：原文来自the journal of experimental medicine，干细胞之家新闻小组成员deron翻译（转帖请注明）& K/ g" e+ p6 q9 U8 i9 \
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翻译内容：% R& F1 n& J* G" o* W/ C/ b' d
具有严重免疫缺陷（SCID）的C.B-17小鼠，因其缺乏功能性B、T淋巴细胞，而可以接受异种移植物，因此，能够用于人类恶性肿瘤的生物学研究。两种不同的人类B淋巴瘤细胞系——SU-DHL-4和OCI-Ly8——注入C.B-17 SCID小鼠体内。通过静脉内或者腹腔内注入不同剂量的细胞，可诱发小鼠生成肿瘤甚至死亡。各种小鼠组织中的肿瘤细胞可以用克隆肿瘤存活实验（TCA）测得，这种测定方法是用抗人B细胞抗原（CD19）的单克隆抗体（mAb）将冰冻部分着色并用PCR技术扩增检测。" N4 k9 @2 e! r5 {9 S9 `) H
一种淋巴毒效应细胞的方法开发并用于选择性减少骨髓中的肿瘤细胞。这些效应细胞是通过将外周血单核细胞置于干扰素γ（IFN-γ）、抗CD3抗体和白介素2（IL-2）中培养得到。IFN-γ加入的时机至关重要，最好在IL-2处理之前加入。细胞分别在IFN-γ和IL-2刺激之后，可以在抗CD3抗体作用下扩增。这些细胞可以进一步用IL-1活化，但是不要用肿瘤坏死因子α刺激。用这个方案，我们通过克隆存活实验测得99.9%的肿瘤细胞死亡。有趣的是，尽管效应细胞对淋巴瘤细胞呈现高毒性的杀伤活性，但是对正常人造血祖细胞（粒细胞/巨噬细胞集落形成单位）亚群几乎没有毒性作用。我们将含人淋巴瘤细胞系SU-DHL-4的鼠骨髓注入SCID小鼠体内以建立肿瘤模型，来进一步检验这些效应细胞（的作用）。结果发现如果注射前骨髓用细胞因子诱导杀伤性细胞处理，那么注入了SU-DHL-4骨髓的小鼠生存能力提高。SCID小鼠为淋巴瘤治疗新疗法的评估，提供了一种行之有效的体内模型。以上描述的细胞因子诱导杀伤性细胞对自体骨髓移植和过继免疫治疗的纯化，有极为重要的意义。
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原文： [attach]31174[/attach]

作者: deron 时间: 2011-8-1 22:05

这个protocol很经典，是目前很多CIK实验室的基本方案。
第0d，加入1000U/ml的人rIFN-γ；24h后，加入50ng/ml抗CD3、300U/ml的IL-2和100U/ml的IL-1。每3d补充IL-2和新鲜培养基。培养基为RMPI1640+10%FBS+25mM Hepes+2mM谷氨酰胺+100U/ml青霉素+100ug/ml链霉素+50uM 2-ME。

作者发现7 C: G3 Y3 ^7 m9 `
同样是在第15天：IL-2单独诱导的细胞可扩增19倍；IL-2、抗CD3诱导的细胞可扩增754倍；而在第21天，加入IFN-γ和IL-1对细胞增殖毫无影响。
尽管抗CD3促进了增值，但并没有增加细胞的杀伤活性（不过数量上去了，总杀伤活性自然也上去了）。
关于IFN-γ,这货对细胞杀伤活性的增强效应，只能通过在加入IL-2之前24h。在IL-2加入之后使用IFN-γ则降低了细胞杀伤力。. z2 q @ `5 H/ J- \
单独使用IL-1不会有活性的提升，但是联合IFN-γ和抗CD3，便有一个杀伤活性的加成。
进一步加入TNF没有明显效果。2 B* [. {# |, Y& G3 i; P* R: q
CIK细胞每次培养中的杀伤力是LAK细胞的73倍。0 t0 S. W! Q% b& s
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作者: 大少爷 时间: 2011-8-2 08:13

DC-CIK细胞
细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）与同源树突状细胞（DC）共培养后为DC-CIK细胞。细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer cell，CIK）是一种高效、新型免疫活性细胞，是恶性肿瘤过继免疫治疗的重要手段之一。树突状细胞（dendritic cells，DC）是目前发现的功能最强的抗原呈递细胞（APC），它通过处理、呈递抗原，介导机体免疫应答。 % Y# g3 |% v0 j
制备的单个核细胞（MNC），置于37℃，5% CO2培养箱培养3小时，收集非贴壁细胞用于诱导培养CIK细胞，贴壁细胞诱导分化出成熟DC。将成熟DC和CIK细胞按1∶10的比例混合培养3天，用MTT法检测DC-CIK共培养细胞的杀伤率。在DC培养的第9天用流式细胞仪进行免疫表型分析，在CIK细胞培养的第9、14、21天分别取少量细胞进行流式细胞术测定，DC-CIK共培养物共培养3天后进行流式细胞术测定。
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