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标题: 关于PCR时Taq酶的选择 [打印本页]

作者: 军医 时间: 2011-8-4 22:33 标题: 关于PCR时Taq酶的选择

从cDNA上扩片段，大家觉得通常用什么Taq酶效率比较高，扩的效果好呀？

作者: like_gj 时间: 2011-8-4 23:17

我们实验室用的都是TaKaRa的，保真性比较好不过有点贵6 @; N* H% n3 c5 Q3 @
Fermentas也还可以吧毕竟cDNA扩的不长一般的酶应该都可以

作者: zhangyan813 时间: 2011-8-5 11:55

不知道打算克隆什么基因，这个基因是不是高表达基因，要是高表达基因用宝生物的普通的rtaq酶应该就没问，关键是看你的引物怎么样；要是这个基因不是高表达的，或者你后续实验对基因要求很高，可以考虑用宝生物的高保真酶，或者EX tag酶。

作者: 军医 时间: 2011-8-5 18:33

回复 zhangyan813 的帖子* c( J/ q0 k/ w$ r7 @# e# R: s
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宝生物的高保真酶以基因组为模板还挺好，以cDNA为模板效果一般，用primestar没有扩出来，只扩出来一次就再也没扩出来了

作者: 军医 时间: 2011-8-5 18:34

回复 zhangyan813 的帖子

宝生物的高保真酶以基因组为模板还挺好，以cDNA为模板效果一般，用primestar没有扩出来，只扩出来一次就再也没扩出来了

作者: hndxws 时间: 2011-8-5 18:53

toyobo的kod很好，我已经用这个在cDNA里克隆三个基因了

作者: shqinzhu 时间: 2011-8-7 16:23

如果是长片段的话，我一般用LTaq,段片段高表达，普通的taq, 高保真用的HiFi

作者: rain2402 时间: 2011-8-8 09:07

短片段用EX-taq就行（TaKaRa的，Fermentas的，天根的）长片段用LA-taq，（TaKaRa的）

作者: sylar.wy 时间: 2011-8-17 15:44

rTaq : 高突变率, 扩增效率较高, 适用于菌落PCR的鉴定. (推荐产品东盛科技的PCRmix(2×) 1000×10ul 体系180元.
ExTaq: 适合2Kb一下片段的扩增. 具有比较好的保真性(Takara不错).
UltraPF: 2kb以上. 高保真,高速度. (复能, NEB,Takara).

作者: wang3033 时间: 2011-8-18 20:22

1.一般扩增就用普通的Tag酶即可，国产的鼎国普通的Tag酶成本1U<0.2元。
2.做克隆用Pfu酶即可，国产的鼎国Pfu酶成本1U<0.5元，反正我用的挺好，当然用全是金的Transtar酶也可以，比鼎国的略贵。( s: A) r- E" R# `7 `
3.PCR扩增国产的Tag酶，Pfu酶完全可以胜任，用进口的洋货没有必要，想要烧钱，就用进口的。

作者: weiyepan 时间: 2011-8-19 22:44 标题: 标题

takara的LA酶扩基因组是不错的，但是保真性一般。如果是扩其它模版建议用复能的，性能和fermentas的fusion一样，还便宜，又快又好用。我们扩过10k的片段还可以。

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