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标题: 关于血清污染 [打印本页]

作者: 1301918986 时间: 2011-8-7 12:32 标题: 关于血清污染

最近我们实验室出现多次污染，后来在血清中发现疑似污染的迹象，将纯血清放置在显微镜40×物镜下能看到有种像两个亮亮的小球连在一起的微生物，没发现其运动，是不是双球菌？还有一批血清是里面含有较多黑点点的生物，这个可以明显看见它在运动。有经验的大侠帮忙分析一下是血清污染了吗？

作者: bllx58 时间: 2011-8-8 10:55

如果是菌一般能很明显的看到非常活跃的，你那个可能只是微粒震动，我觉得

作者: mayansen1314 时间: 2011-8-8 11:38

我们实验室也是，还以为是环境的问题呢，实验室有熏蒸了一下效果还不是很明显，我们也换血清了，正在看效果，等两天再给你回复吧，如果有好的建议记得多多分享啊

作者: 琛儿326 时间: 2011-8-8 22:34

我们实验室最近污染也挺严重的，后来发现培养箱内有菌落。用75%酒精清洗，紫外照射之后，觉得还是有部分细胞染菌。是不是夏天气候潮湿，也比较容易染菌啊？挺让人郁闷的

作者: wang3033 时间: 2011-8-9 09:18

1.从你的描述看，是污染了
2..用新开封的血清配培养基，观察有无污染，
3.配置培养基时，直接将血清加入培养基中，得到所需浓度后，用0.22滤膜过滤，即使血清有细菌污染，也可以控制。

作者: 1301918986 时间: 2011-8-10 10:40

回复 bllx58 的帖子! x' f/ Z" Z n* J' K! y' O8 v
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可是当我们仔细看的时候它是在扭动，而且有时候还是翻转的，应该不是微粒震动吧。

作者: mayansen1314 时间: 2011-8-11 09:27

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我们实验室的习惯是不过滤血清的，担心血清过滤之后会降低血清中某些生长因子含量，不知道阁下的细胞在滤过的血清中生长情况咋样

作者: amosummer 时间: 2011-8-11 09:42

首先看看这种血清对细胞影响大不大，在培养后几天内观察培养基是否浑浊了。然后买一批新血清再观察细胞培养状况，做为对照。

作者: 1301918986 时间: 2011-8-11 12:10

回复琛儿326 的帖子8 G: l4 ]$ r8 t# V- L: J

恩，我们也是最近发现有污染的，而且每次一旦发现有污染的就会立即对培养箱进行消毒，可是之后还是发现有污染的，真是让人头疼啊。

作者: 1301918986 时间: 2011-8-11 12:13

回复 amosummer 的帖子 q) v$ a% T1 R
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这个污染在培养过程中培养液不会发生浑浊，而且重新换了另一批血清后还是会有那种会动的黑点点，但是它的增值速度不是很快。

作者: 1301918986 时间: 2011-8-11 12:15

回复 wang3033 的帖子) N+ K6 F% j+ y9 k5 y9 t8 Z

血清污染用0.22滤膜过滤恐怕不行吧。

作者: mayansen1314 时间: 2011-8-12 09:36

回复 1301918986 的帖子

请问你们培养箱消毒具体怎么操作？是不是就只是用新洁尔灭清洗一下？

作者: youtellme 时间: 2011-8-12 17:58

你做培养基涂个平板，第二天观察一下就知道是不是污染的。
有那些黑点有时候并不是污染，可能是血清添加时间太长了，保存条件不当造成的。

作者: youtellme 时间: 2011-8-12 17:58

你做培养基涂个平板，第二天观察一下就知道是不是污染的。" \& T4 n7 ]$ e# U; p
有那些黑点有时候并不是污染，可能是血清添加时间太长了，保存条件不当造成的。

作者: wang3033 时间: 2011-8-13 20:35

回复 mayansen1314 的帖子7 \. o$ H5 n v! x3 {0 Y

1.我们用血清过滤的和直接加血请的培养基，细胞培养状况基本没有区别。* d# l# N |3 `/ y
2.蛋白质分力量再大，也可以通过滤膜，何况细胞因子的分子量通常不大。

作者: wang3033 时间: 2011-8-13 22:35

回复 1301918986 的帖子# f: Y3 x1 ^1 r$ t( i
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1.0.22um滤膜对于细菌和支原体污染没问题
2.对于污染造成的内毒素则不能去除

作者: 1301918986 时间: 2011-8-17 08:36

回复 mayansen1314 的帖子

我们培养箱消毒是先用75%酒精擦拭内部，然后紫外照射半小时

作者: 1301918986 时间: 2011-8-17 08:39

回复 youtellme 的帖子# P0 {7 [% {6 q2 o" ?7 i7 d

好的，试试。你说的保存不当是指什么？我们的血清买回来一直在-20℃放着，用到用的时候放在4℃溶解。

作者: youtellme 时间: 2011-8-17 14:12

回复 1301918986 的帖子
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你是配一次用多久的

作者: 1301918986 时间: 2011-8-17 16:18

回复 youtellme 的帖子
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你说是培养液吗？

作者: kosmos.y 时间: 2011-8-18 15:12

看一下血清颜色有没有大变化，还有可以试着换一个血清培养，看一下会不会出现同样情况，

作者: 1301918986 时间: 2011-8-18 16:45

回复 kosmos.y 的帖子, G+ C( T( ?+ [: i9 K( U0 C

我们的血清有时候颜色差异还挺大的，有的时候有点发红，有的则偏黄，但是疑似污染的这批血清颜色还挺正常的

作者: shayatoulhb 时间: 2011-8-18 17:28

我们实验室已经失败了两批了，郁闷呢，估计与天气潮湿有很大关系吧

作者: 1301918986 时间: 2011-8-19 08:24

回复 shayatoulhb 的帖子4 x3 C' m. ?, E( f, v5 m! S

你别说我们实验室最近两个月的实验也是很不乐观啊。继续努力吧。

作者: 我不是小龙虾 时间: 2013-5-22 10:09

回复 1301918986 的帖子
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你那血清中含有的两个亮亮的小球知道是什么了吗？我前两天也出现这个问题了，细胞全污染了，在200倍镜下观察解冻的血清，也出现很多两个亮亮的小球，运动的挺快的，而且在4度感觉能增值。

作者: 细胞海洋 时间: 2013-5-22 10:47

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作者: aulenuyah 时间: 2013-5-22 23:09

取一点在培养箱中孵育24h，看看你说的小颗粒是不是增多了，如果多了就是污染了

作者: colin0422 时间: 2013-5-24 16:36

http://zh.invitrogen.com/etc/medialib/files/Cell-Culture/PDFs.Par.28810.File.dat/PG1129-PJ3210-CO32033-Gibco%20Sera%202013%20Mini%20Brochure_FLR_spreads(1).pdf! j5 J/ i( b0 B/ E
这个链接不知道能不能打开，里面Q&A部分有提到些注意事项。FBS一般是干冰运输，解冻后分装，反复解冻会影响到效果。

作者: Hellfire 时间: 2013-6-9 10:14

血清中含有明显可见运动的黑点状生物可以肯定是污染了，可以取点血清做个细菌检测。像血清这些常用试剂可以整瓶分装冻存，减少因为污染而损失的量，如果原瓶未开封就污染了，直接找经销商退款或者调换就是。

作者: watchen198891 时间: 2013-6-9 12:31

我觉得你要确定一下的话就直接空培养血清，培养一天到两天，看是否会出现黑点大面积扩增，而且贴在培养皿上，如果有，这个就比较确定是染菌了。也有另外一种情况，可能是长黑胶虫了，这个需要你去做点小实验分析一下了。祝你好运

作者: 三月桂花香 时间: 2013-6-9 14:25

可以取血清出来进行菌落培养，然后实在把握不准可以去做下菌种鉴定，这样子可以很明确是哪种类型菌污染，针对性更强。

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