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标题: 转化的问题 [打印本页]

作者: huangcong1988 时间: 2011-8-11 09:28 标题: 转化的问题

由于铺板前吹打沉淀时起了很多沫子，铺板铺得有点厚，结果长出的菌细而密，挑菌很不容易，不知道是为什么

作者: Learner 时间: 2011-8-11 13:09

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我一般都是铺两个板，10ul一个，100ul一个，这样无论菌密度高低都可以挑出单个菌落。

作者: xiangchou812 时间: 2011-8-11 15:15

可能是你的转化效率很高，也可能时抗生素出现问题或者是质粒弄混了。

作者: rain2402 时间: 2011-8-11 15:26

第一种可能性是你的感受态效果太好了，转化效率太高了。第二种是你的培养皿正置了，蒸发的水流到培养基上了，导致菌连成一片。你找下原因就知道了。:'(

作者: luoziwei 时间: 2011-8-11 17:46

这几天我也做这个，经过几次询问与摸索，终于能做出来了！我转化的菌也有连成一片的，但在旁边也有单个菌落的，太多了，他们说一般要挑几十个，我就挑了几个，呵呵，结果PCR还好了，同志们，加油，不要灰心！

作者: luoziwei 时间: 2011-8-11 17:47

这几天我也做这个，经过几次询问与摸索，终于能做出来了！我转化的菌也有连成一片的，但在旁边也有单个菌落的，太多了，他们说一般要挑几十个，我就挑了几个，呵呵，结果PCR还好了，同志们，加油，不要灰心！

作者: huangcong1988 时间: 2011-8-11 21:50

回复 xiangchou812 的帖子5 S1 k, o: ~9 N

是的，质粒稀释得不够，只稀释了20倍，可能是因为浓度太高了，而且质粒转化效率很高

作者: huangcong1988 时间: 2011-8-11 21:52

回复 luoziwei 的帖子3 X+ V/ r8 t9 u, r3 q2 O
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是啊，一般挑菌都是挑单个的菌落，不过我的长得太密，周边又没怎么长，应该是在铺板时候没铺匀吧？

作者: huangcong1988 时间: 2011-8-11 21:53

回复 rain2402 的帖子
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应该是转化效率太高了吧，那个氨苄在培养基中的浓度是多少？还有一般氨苄是1克一小瓶的粉末，你们是怎么稀释的，怎么配的？

作者: 绿雪 时间: 2011-8-11 23:47

如果是做质粒转化而不是连接产物转化的话，建议不用复苏培养，直接热击冰浴完就涂板，长得很漂亮的，我都是这么做的。

作者: huangcong1988 时间: 2011-8-12 08:40

回复绿雪的帖子

谢谢，这个还真没试过，是质粒不是连接产物

作者: huangcong1988 时间: 2011-8-13 21:03

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今天我试了下，感觉还是长得很密，这是为什么啊？还有铺板之后是不是要长很长时间才能长得比较好啊？

作者: 绿雪 时间: 2011-8-13 22:53

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那是质粒太多了吧。你用了多少质粒呢？

作者: huangcong1988 时间: 2011-8-14 09:02

回复绿雪的帖子2 ~2 r' h0 }9 v8 _8 I) W

用的5微升质粒，浓度不清楚，不过感受态用了50微升，之前师姐说用三十微升就行，可能是感受态加多了吧？

作者: 绿雪 时间: 2011-8-14 23:23

5ul质粒太多了，0.5ul都足够。除非你的浓度极低。

作者: huangcong1988 时间: 2011-8-15 08:40

回复绿雪的帖子" L1 p! s. U# l( D- j
8 {5 m) [2 c& I' ?+ N
o 谢谢，我再试试，呵呵

作者: huangcong1988 时间: 2011-8-15 08:41

回复绿雪的帖子1 {9 f; u: A7 k( m" ?% O
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不过长得密倒无所谓，主要是长得细，不好挑菌啊，这怎么办呢？

作者: 绿雪 时间: 2011-8-19 00:52

因为长得密，空间和营养都不够，所以长得小。

作者: huangcong1988 时间: 2011-8-19 07:54

回复绿雪的帖子8 F' L; g# v% n. C, V3 R& R

呵呵，终于成功了，稀释了50倍，你那个方法真的很不错，学习了

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