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标题: 96孔板筛选ES细胞的问题 [打印本页]

作者: 歪歪 时间: 2011-8-11 16:01 标题: 96孔板筛选ES细胞的问题

我正在筛选打靶的ES细胞，克隆接种到96孔板中，PCR鉴定。但第一步提取DNA就出现了问题，第一次我将沉淀的黏糊糊的DNA转移到1.5ML的离心管中14000rpm离心15min，但最后洗完了，没看到白色的DNA沉淀，这是为什么啊，而且测浓度也没有，难道DNA太大，不能贴到管底？0 h0 t. r8 \) [; d
第二次我直接将96孔板反扣过来，这次感觉是反过来的时候速度太快，有些DNA倒掉了，请教下大家都是怎么弄的啊？

作者: llecstem 时间: 2011-8-12 09:05

分子克隆里，有一个提取96孔板细胞专门做PCR的方法，你可以看一下。我现在也在做gene targeting，不过是在6孔板里提取基因组。我们是挑单克隆后先在24孔板里培养，然后一部分冻存一部分转到6孔板里提取基因组，工作量很大，想问一下你们是怎么做的？

作者: rain2402 时间: 2011-8-12 09:07

你用提取DNA的盒子提的吗？第一次你转移到1.5ML的离心管中时，黏糊糊的那不是DNA，是变性的蛋白质，我们都是按照盒子的说明书提取的。

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