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标题: 扩大培养，摇菌到底要摇到什么程度 [打印本页]
作者: huangcong1988    时间: 2011-8-18 07:26     标题: 扩大培养，摇菌到底要摇到什么程度

这几天真的是很不顺，不知道为什么，前几天一直做转化，结果板子除了问题，菌一直长得不好；近几天提质粒，结果昨天做的时候不小心碰倒了架子，所有做的都白费了，我又重新挑菌摇菌，结果昨天晚上摇菌的时候一个东西从摇床上掉下去了，卡主了摇床，不知道摇了几个小时，也没见菌液太浑，所以想问一下，摇菌到底要到什么程度就行了？一般说是14~16个小时，由于不知道摇床什么时候停的，所以现在我不能从时间上判断摇菌程度，我想问一下培养基浑浊到什么程度就说明菌摇好了，可以提质粒了？
作者: rain2402    时间: 2011-8-18 08:51

要是提取质粒，肉眼看，不透明了，一摇呈云雾状，5ml的菌液足可以提取40ul的质粒。还有测OD值的，但是一般实验室摇菌就是目测了。呵呵
作者: yangpan521    时间: 2011-8-18 08:58

如果用的是透明的器皿摇菌的话，用肉眼看，从瓶的一边看不到另一边的刻度（一般器皿都会有刻度的吧）基本上就算混了，也可以放在四度冰箱沉淀1h后，看菌体的沉淀量就知道了" a& J/ [1 @- K) @, `. a

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作者: amosummer    时间: 2011-8-18 09:15

其实只要看到浑浊的菌液就行，不要摇老了就好。提质粒没这么高要求的。
作者: sylar.wy    时间: 2011-8-18 09:17

浑浊即可。。按照以前的经验目测啊。。没关系的。但是不能摇太久，抗生素会失效。。
作者: 懵懂干细胞    时间: 2011-8-18 09:29

LZ你的问题不是你不知道菌摇到什么程度吧，是你最近运气不好，都不敢相信自己的判断了吧！
+ {" D9 R+ J9 y4 J没关系的，相信自己！
作者: xiangchou812    时间: 2011-8-18 10:14

不用管摇了多长时间，继续培养就行。人家说的14-16h，我想一是怕抗生素失效引起杂菌生长，二是怕细菌培养太久给老化了。
作者: xiangchou812    时间: 2011-8-18 10:14

不用管摇了多长时间，继续培养就行。人家说的14-16h，我想一是怕抗生素失效引起杂菌生长，二是怕细菌培养太久给老化了，影响质粒产量。
作者: huangcong1988    时间: 2011-8-18 11:32

回复 懵懂干细胞 的帖子
6 s" D6 {0 z/ l; S6 m3 u- }0 v, n, w/ u* ?% a
谢谢，非常感谢
作者: huangcong1988    时间: 2011-8-18 11:32

回复 xiangchou812 的帖子
0 m/ k3 Q! V4 ~& b& M- l
" t7 `3 o' I- @) C2 H& {6 N时间长了长杂菌
作者: huangcong1988    时间: 2011-8-18 11:33

回复 amosummer 的帖子$ X0 l: o: Z; p' e7 t0 Z, d- E. s
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转染细胞用的质粒
作者: huangcong1988    时间: 2011-8-18 11:34

回复 rain2402 的帖子
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7 {! [. }: u# \( W; B7 ]+ z# v, M我是50ml菌液
作者: huangcong1988    时间: 2011-8-18 11:35

回复 yangpan521 的帖子6 m7 g7 H# y6 C, L; ]7 E4 @0 E
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主要是浑浊到什么程度，因为不能只摇一下就行吧？不能5oml只提出5ml的量吧？
作者: xiangchou812    时间: 2011-8-18 22:36

huangcong1988 发表于 2011-8-18 11:32 # ]4 _$ j/ ?, L- Y! S2 u6 `& ?$ w. M
回复 xiangchou812 的帖子
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时间长了长杂菌
; p/ ^4 E+ \/ X" F; e
时间长了就长杂菌么？我觉得不是这样的，而是像平板里抗性克隆旁边长出的卫星菌落一样。



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