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标题:
关于质粒浓缩的问题
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作者:
huangcong1988
时间:
2011-8-20 20:15
标题:
关于质粒浓缩的问题
之前提的质粒，测了一下浓度，有的可以，有的浓度太低了，我想知道怎么浓缩质粒，师兄说可以再过柱，我不知道怎么再过柱，因为现在质粒是溶液了，即使加到柱子里，离心，应该质粒跟ENDO-FREE SOLUTION 会一起下来吧（去内毒素提的）？求解释
作者:
langziforever
时间:
2011-8-20 20:41
如果有冷冻干燥仪，可以在里面甩干一下，不用完全干燥，只需要让体积减少些，然后再调节到需要的浓度就行了，如果没有干燥仪，就用NaCl和无水乙醇用标准的步骤沉降一下，然后再溶解在较少的体积，但是沉降过程也会有损失，所以，沉降在-20C、4hrs以上，同时再溶解时尽量少溶一些！
作者:
wang3033
时间:
2011-8-20 21:27
加质粒1/10体积的NaAC(pH5.2)，然后加等体积的异丙醇，混匀10000rpm离心5分钟，用70%酒精洗两次，加所需体积的无菌TE即可得到想要浓缩的质粒了。
作者:
huangcong1988
时间:
2011-8-21 08:35
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wang3033
的帖子
3 c3 ]8 R6 c8 E# G c. P
/ K+ c1 |8 q3 D; Y9 U
谢谢，我用的是去内毒素提质粒的，所以可能重新过柱可能比较保险一些，我理解的重新过柱是加乙醇，之后就转移到柱中，其余同下面的
作者:
wang3033
时间:
2011-8-21 09:12
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huangcong1988
的帖子
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; l2 [; l1 l, L) a
过柱损失大一点，我说的沉淀法几乎一点不损失质粒。
作者:
hygene
时间:
2011-8-21 16:59
如果是用于细胞转染的话， 确实需要重新过柱，去内毒素的。
作者:
christophe
时间:
2011-8-21 18:51
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hygene
的帖子
" L% l$ M1 x5 D& o# s; ]0 ^( T
& d; w# a# s. l- O$ }- ?. I
那手工提取的质粒，不是没有过柱子去内毒素这一步吗？
3 L1 x' }, O- @6 _
所以乙醇沉淀浓缩的方法应该也是可以的吧
作者:
hygene
时间:
2011-8-21 22:43
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christophe
的帖子
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9 M; o& x8 Q/ ]9 j& ], ?. B/ J% V
手工提取确实没有柱子，但是这样的质粒没有去除内毒素，用于细胞转染会导致细胞大量死亡，甚至最终实验失败。
: o, a6 x, R7 U7 A
作者:
hygene
时间:
2011-8-21 22:52
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christophe
的帖子
" G& o( k- y' ^! I2 P
2 i1 L: R7 M. I4 n- Z4 K% c
手工提取确实没有柱子，但是这样的质粒没有去除内毒素，用于细胞转染会导致细胞大量死亡，甚至最终实验失败。
' L! U7 k, V; S) f. j
作者:
hygene
时间:
2011-8-21 22:53
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christophe
的帖子
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( A( e# `/ k* T' a8 s
手工提取确实没有柱子，但是这样的质粒没有去除内毒素，用于细胞转染会导致细胞大量死亡，甚至最终实验失败。
1 h6 V" p1 i& t8 S; U$ {
作者:
christophe
时间:
2011-8-22 00:08
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hygene
的帖子
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[& \1 @. p7 W- ]" p8 X4 H
那柱子提过之后去掉了内毒素，再用乙醇沉淀浓缩的话应该还是没有内毒素的吧？
作者:
hygene
时间:
2011-8-22 08:50
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christophe
的帖子
" j0 S6 U/ V. x5 o
$ {& N* l7 {4 B. `$ M# O
可以先用乙醇沉淀浓缩，再过柱子
作者:
huangcong1988
时间:
2011-8-22 10:38
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hygene
的帖子
7 X, v H, d$ W) K
, T M7 {; q" a% `" A
是用于细胞转染的,所以还是想用去内毒素的柱子再过一遍,但是我不知道再过柱是从哪一步开始
作者:
huangcong1988
时间:
2011-8-22 10:39
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hygene
的帖子
! z) x) a) S9 n* C, D
8 g0 L% z r& R
想问问你,再过柱是从哪一步开始?
作者:
hygene
时间:
2011-8-22 11:12
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huangcong1988
的帖子
; g3 s1 f7 l6 C% p
, e- j2 r& |3 m/ A) D6 v) h( p
乙醇沉淀浓缩后用小体积超纯水稀释，接下来就可以过柱子了。
作者:
huangcong1988
时间:
2011-8-22 12:50
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hygene
的帖子
* U: X- ]0 {8 n" h
6 G* ^& U, ]1 \0 Y
用无水乙醇还是75的？应该不会产生沉淀吧？就是说加了乙醇之后转移至柱中，静置，离心，完了之后洗脱？
作者:
christophe
时间:
2011-8-22 17:04
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hygene
的帖子
& O! k2 W3 F3 L$ ^4 l1 C
' s, W& X' I5 j2 O |9 X
你的意思是将水浓缩溶解的质粒过一下柱子，质粒通过了柱子，而内毒素被截留在柱子上了是吗？
作者:
POPOLD
时间:
2011-8-22 17:08
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langziforever
的帖子
/ H$ _7 F% z' j# A' B6 c, h
& A% I* V8 K# a" Z) {
抽真空离心机
作者:
huangcong1988
时间:
2011-8-25 08:17
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hygene
的帖子
1 w" T$ Q* a' b8 f _
+ g7 M* Y7 r# D& w: u
想问问你质粒浓缩的具体步骤，就是加了乙醇之后，将加有乙醇的质粒加到柱中，然后离心，接着用超纯水洗柱就行了？
作者:
zhouchaoying100
时间:
2012-1-29 11:59
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huangcong1988
的帖子
8 q( X$ _, d; r |, \
# e7 O( L0 \* ]7 N! @; c
你好，我也遇到了同样的问题。请问你的去内毒素质粒重新过柱后浓度能提高到什么样？重新过柱的具体步骤是怎么样的？盼相告，不胜感激！
作者:
细胞海洋
时间:
2012-1-30 10:44
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zhouchaoying100
的帖子
6 l. w2 |' C! d1 k/ G& X
6 W: o! Y% V9 M& R, U% c2 K8 c
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作者:
huangcong1988
时间:
2012-2-8 16:06
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zhouchaoying100
的帖子
3 F; h; N* @4 z) O, p. e1 X) z
) b" h0 ~+ I& j9 Y' z0 A
我试过几次，都失败了，这个还需要接着摸索
作者:
Dongqin11
时间:
2012-9-4 09:18
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langziforever
的帖子
! v% A, K. ~/ b v3 x5 z
% o, U% ]2 M( v
你好，用冷冻干燥仪浓缩怎么操作？用这个浓缩好像要24h，时间较长，而且质粒体积一般较小，可以用吗？
作者:
langziforever
时间:
2012-9-19 11:02
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Dongqin11
的帖子
: r! o% g3 `9 T% B
2 i k# d @* E2 N
那个很简单的，按照仪器操作用就好了！质粒体积小也可以用的！
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