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标题: ips克隆传代挑留的问题 [打印本页]

作者: 573639471 时间: 2011-9-2 17:17 标题: ips克隆传代挑留的问题

最近一瓶iPS有点污染，加药后救过来了，但是克隆大部分分化，T25上有4-5个未分化的状态还好的，打算挑出来，不知道什么时间挑合适，是培养6天左右后长到一定大小，还是越早越好。具体用什么挑，怎么挑，还请指教，本人菜鸟，挑的过程越详细越好。

作者: gact 时间: 2011-9-2 18:41

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你们养ipsc使用瓶子养的啊？
挑取的时候不是很好挑的吧？
不用平皿?
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用注射器划个井字，吸出就可以。

作者: chinesezhang 时间: 2011-9-4 09:37

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需在体式显微镜下操作，我们用显微镊子直接将克隆挑在培养液中，然后接在新的皿中。

作者: 573639471 时间: 2011-9-4 21:05

回复 gact 的帖子0 _- O' Y4 f$ R; J+ z
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你们一直都是用平皿吗？我一直用瓶子呢，还没挑过，传代是胶原酶消化下来，你们不用酶，传代也是挑取吗？
因为我们这老有污染，所有皿用的少。

作者: 573639471 时间: 2011-9-4 21:06

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用枪头吹下来吸到新瓶中行么？

作者: dongxin 时间: 2011-9-5 15:47

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建议先将瓶子中的细胞转移到皿中，再机械挑传。( p' {; f4 K, ^. c4 C9 i
1. 可以将无菌巴氏吸管在酒精灯上略微烧烤后，迅速拉伸玻璃，呈120度角；用镊子在针尖合适位置夹断针尖；将针尖在酒精灯火焰上烧烤融化，得到封闭圆滑的针尖。$ _. e' n2 ?4 ^7 g' ^# q2 k4 R
2. 在镜下，将为分化的细胞克隆分离开来悬于培液上，用移液枪吸取移至新的培液中！
供参考，祝好运！' K; P) \6 w3 p0 a

作者: chinesezhang 时间: 2011-9-15 14:58

回复 573639471 的帖子8 T1 [2 c* e& d7 v0 c+ D7 |( P. j) q- e/ ^
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这样怎么区分开分化的和未分化的克隆呢？

作者: sarah19860420 时间: 2011-11-16 22:42

回复 gact 的帖子
4 x" N4 q! F. G
好办法，O(∩_∩)O哈哈~，学习了

作者: sarah19860420 时间: 2011-11-16 22:43

回复 573639471 的帖子) Y" O( A: T3 I- f

你们用胶原酶消化的时间大概是多久呢

作者: momocy 时间: 2011-11-16 23:08

你说的污染指的是细菌等的污染么？我所知iPS污染了就会分化，一般不能救活。如果你的克隆长的比较好，你观察克隆中间有稍微长老的迹象，或者是克隆开始出现分化的时候就可以挑了，人的iPS的话，本身消化的时候，未分化的克隆会先掉下来，分化了的克隆会后掉下来，时间上有先后。或者，你挑的话，把枪头伸到瓶里面，轻轻吸出克隆，枪头够不到的话用比较长的移液管也行，需要在显微镜下操作的话可以把显微镜搬到安全柜里面，照一会紫外再用。如果你好的克隆比较多，分化的少，你可以把分化的吸掉，再整个瓶消化传代。

作者: 573639471 时间: 2011-11-16 23:24

回复 sarah19860420 的帖子8 \7 _) i7 t- [4 Q" E2 d! D' t

20-30min 或者更长0 e+ D, s! B# i7 `2 D) j2 x

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