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标题: 请教如何分离刚出生胎鼠的卵巢颗粒细胞 [打印本页]

作者: yangpan521 时间: 2011-9-10 20:01 标题: 请教如何分离刚出生胎鼠的卵巢颗粒细胞

因实验需要刚出生胎鼠与12.5天胎鼠的卵巢颗粒细胞，今日事先分离了出生5天的小鼠的卵巢颗粒细胞，实在是太痛苦了，虽然取到了卵巢，但是胰酶很难消化，就将卵巢用镊子捣碎（因为太小无法用剪刀剪碎），可是分离出的细胞量实在是太少，请教高手指点怎样做更好（这是本人第一次做没经验），先谢谢了

作者: hcluo 时间: 2011-9-10 23:13

我们实验室分离过5-10days左右的卵巢颗粒细胞，据经验所知，分离颗粒细胞时，卵巢需要先用剪刀或镊子捣碎（尽量剪碎），两步酶消化，首先胶原酶，然后胰酶消化（胰酶消化时间需要严格控制，不能过长），最后加入适量血清中和酶活性，离心可以得到混合细胞（颗粒细胞，各个时期的卵原细胞），将细胞放入24孔板内（孔经过明胶或基质处理，容易细胞贴壁），大概30分钟后，轻微的吸走所有的溶液，孔内剩下的大量的基本是颗粒细胞（容易贴附），加入新鲜培养液；将吸走的溶液内的细胞放入另外一个孔内，大概30-40min后，轻吸去除孔内的溶液，剩下的部分可以得到少量的颗粒细胞。另外，如果实验室有条件，可以进行磁珠筛选，这样可以得到更纯一点的颗粒细胞。

作者: yangpan521 时间: 2011-9-11 08:23

谢谢你的回答，可是有一点卵巢很小镊子都很难夹住，我用的是油丝镊，间断正好和卵巢卵巢一样大，很难弄碎

作者: hcluo 时间: 2011-9-12 20:36

使用德国进口的专门的手术镊子，一般可以夹住的。其实弄碎方法很多，有人用很小的专用的碾磨磨碎组织，另外，用德国进口的那种手术剪刀，基本可以保证剪得很碎了。

作者: yangpan521 时间: 2011-9-13 08:10

谢谢

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