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标题: 请教提取总蛋白时要加哪些蛋白酶抑制剂 [打印本页]

作者: 飞翔的十字架 时间: 2011-9-14 11:05 标题: 请教提取总蛋白时要加哪些蛋白酶抑制剂

测alp时裂解细胞，同时还要检测总蛋白的量* ]- \8 I n" p9 v( n- \$ [
商品化的蛋白酶抑制剂混合物有6中成分，而我以前只加亮抑酶肽和APROTININ，不知道这样会不会有部分蛋白降解
请教大家裂解细胞时加哪些成分

作者: langziforever 时间: 2011-9-14 11:27

没有测过alp，但是以前做蛋白提取实验室一般都是加几种蛋白酶抑制剂的cocktail，效果还不错，也有人只加EDTA和PMSF，保证冰上操作也没有发现明显的蛋白降解，毕竟一般的蛋白酶抑制剂在四度的半衰期也就半个小时吧！而且有毒的说！不过鉴于楼主测真核细胞的酶活，还是加混合抑制剂比较保险。也可以尝试不加比较一下！

作者: feihua011 时间: 2011-10-10 19:03

楼主要研究的酶如果是确定而且很稳定的酶的话，不加也没有什么的。看自己的情况吧

作者: sciencezhu 时间: 2011-10-11 00:23

我裂解蛋白的时候是加PMSF和Cocktail ，在冰上操作的，好像没什么问题，如果是收集磷酸化蛋白还需要加一些磷酸酶的抑制剂防止目的蛋白去磷酸化。

作者: 4445655 时间: 2011-10-11 13:37

常用的蛋白酶抑制剂主要有如下几种：
PMSF，EDTA，胃蛋白酶抑制剂（pepstatin），亮抑蛋白酶肽（leupeptin），胰蛋白酶抑制剂（aprotinin）5 c$ |) M1 _$ B4 r/ F: G( ?% C0 r
PMSF好像一般提取蛋白都要加的，以前我们实验室提取蛋白质的时候还加上了亮抑蛋白酶肽，效果很好，是sigma公司产品。1 ^ P' u; {, ^& ]8 a! G9 J9 H
还有一种罗氏公司的Complete Protease Inhibitor Cocktails的蛋白酶抑制剂．. ^( v7 B- H) S# I1 |
用一片Complete 便能抑制多种不同的蛋白酶，包括丝氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶及金属蛋白酶等，以上仅供参考~。希望楼主实验顺利。

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