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标题: 关于lipo2000转染的问题 [打印本页]

作者: guo6259 时间: 2011-9-15 14:48 标题: 关于lipo2000转染的问题

最近在做lipo2000转染293T包装逆转录病毒。用GFP做阳性对照。我的步骤是10cm盘293T密度500万过夜。12小时后转染，转染前换液。lipo（39ul）+opti（1.5ml）混合5min（轻轻吹打10下），DNA（15ug）+PCL（15ug）+opti（1.5ml）混合再和前者（lipo+opti）一起混合20min（轻轻吹打10下）滴加到293T盘中。包装病毒。大概72小时后观察。发现效率不是很高，没有达到90%。望诸位高手解答。谢谢！！

作者: varing 时间: 2011-9-15 15:36

悬浮感染会不会好些？293T悬浮时未贴壁前转染

作者: 不倒翁 时间: 2011-9-15 16:58

我们一般都悬浮转的这样效率会高一点但是转染结束最好6-8小时换液细胞不能太少否则会死地很厉害

作者: amosummer 时间: 2011-9-15 17:09

90%？我从来没有达到过，有70%左右就很不错了。

作者: juan880929 时间: 2011-9-16 08:10

将DNA的量增加到24ug，脂质体的量增加到60ul。我们都是这样转的

作者: trl137 时间: 2011-9-19 23:36

我也做过用病毒包装293T，也是lipo2000转染。你转染的效率已经很高了，一般达到70%左右就很不错了。而且在转染后6~8小时换液，24小时观察转染效率，你在72小时才观察，可能lipo2000存在时间太久对细胞有毒害作用。

作者: kexiaoxue 时间: 2011-9-20 13:38

我最近也想做lipo2000转染293FT包装逆转录病毒，不知293FT是否与293T一样，各位大侠能否介绍详细点，新手好好学习一下。弱弱的问一句：“DNA（15ug）+PCL（15ug）+opti（1.5ml）”中PCL是什么？

作者: huangcong1988 时间: 2011-9-20 14:23

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想问问您，您的293T细胞哪里买的？

作者: huangcong1988 时间: 2011-9-20 14:23

回复 trl137 的帖子

想问问您293T哪里买的

作者: trl137 时间: 2011-9-20 14:34

很多研究机构都有的，你可以通过一定的关系索要

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