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标题: 人iPS培养可以用已经建立的小鼠MEF细胞系吗？ [打印本页]
作者: bigsnow55    时间: 2011-9-21 13:17     标题: 人iPS培养可以用已经建立的小鼠MEF细胞系吗？

看到上海细胞库有小鼠MEF细胞系，名称：BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纤维细胞（http://www.cellbank.org.cn/detail_1.asp?id=31），好像是转入了一些病毒什么的。) D8 B) @6 G, F  w, e2 @3 i! `0 T
请问如果想培养人的iPS或ES细胞，可以用这种已经建好的MEF细胞系吗？
' u4 _3 e$ {; M: Y/ l3 L# e另外，iPS培养对于MEF的基因背景是否有要求，如BalB/C，C57或者昆明小鼠，有无区别？
作者: jj.jianjia    时间: 2011-9-21 14:11

你们要自己照辐射吗？我用的是公司买的用伽马射线照过的。
作者: huangcong1988    时间: 2011-9-21 14:48

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8 _; D+ O! F7 m9 e, Y
# N- X5 d5 e, D/ F你是说制作饲养层吧？用丝裂霉素C也行吧？
作者: jj.jianjia    时间: 2011-9-22 05:29

也是可以滴。。。
作者: jj.jianjia    时间: 2011-9-22 05:29

也是可以滴。。。
作者: bigsnow55    时间: 2011-9-22 15:15

谢谢大家！不知道有没有谁用细胞系做饲细胞层？:)
( l( f9 S8 I8 z: v; A一般野生型MEF用第三代的，那永生化的细胞系用多少代比较合适呢？
作者: haijing12585    时间: 2011-9-22 23:01

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. {. c6 h7 A6 `1 V. a7 C( w! S
! c# g# b+ R- f6 i/ }$ O5 S应该是可以的，有人也用STO细胞作为饲养层来培养iPS的
作者: bigsnow55    时间: 2011-9-22 23:51

haijing12585 发表于 2011-9-22 23:01 6 }2 y7 _! S$ x# i& Y9 l
回复 bigsnow55 的帖子: E% G' t5 v& |8 }( l  S

# e4 ^: m8 x) T- i应该是可以的，有人也用STO细胞作为饲养层来培养iPS的

4 A9 }; A( U! O( W. y, g  M谢谢！我刚才搜索看到了，在ATCC有这种细胞。
作者: juan880929    时间: 2011-9-23 09:43

可以买他们的，也可以自己做
) x. p" J: b3 V+ G6 i做feeder最好的小鼠品系细胞是CF1，但是国内没有这种小鼠，所以一般ICR或者昆明白小鼠的胎儿成纤维细胞就可以，如果人的胚胎干细胞状态好的话，这两种品系小鼠的饲养层一般没有问题，没有必要花钱买细胞系
作者: bigsnow55    时间: 2011-9-23 22:51

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: w, {9 g5 u) K0 ?; {4 F. N5 [: H# w- D3 Z; n
谢谢juan880929！回答很专业！
2 R' G% K' f% @5 M: C& }我现在在用C57 BL/6小鼠做MEF，不知道是否合适，请不吝指教，谢谢！
* T6 q, {5 A& ]& f# J
作者: guo6259    时间: 2011-9-23 23:20

感觉人的最好用CF-1做feeder。鼠的要求要低一些。ICR，昆明白都可以的。cf-1有一点自己扩增就行的。养满一个10cm盘用丝裂霉素C处理3h，冻起来能用好久的。但cf-1确实不好搞啊。
作者: bigsnow55    时间: 2011-9-24 09:48

回复 guo6259 的帖子7 u% q5 K! u3 P. i

; D+ [; U1 q/ @% s, G9 A, y看来还是昆明小鼠比较现实，国内公司也有STO卖，但不知道效果如何，估计价格也不菲？
1 C2 i( i+ T5 \0 k" Z我也已配了一些C57的孕鼠，打算先试试看。
作者: bigsnow55    时间: 2011-9-25 11:04

juan880929 发表于 2011-9-23 09:43
. H/ u, b* W; ?8 Z5 M可以买他们的，也可以自己做( R/ X( N: K# }6 i
做feeder最好的小鼠品系细胞是CF1，但是国内没有这种小鼠，所以一般ICR或者昆 ...

4 x3 n9 M& F. A3 a4 b1 X# Rjuan880929，你好！很高兴与你讨论。5 N4 b1 L" p3 K6 g* I+ x5 f
你说一般用ICR或者昆明小鼠做MEF，请问有相关文献吗，能否发给我一份。
9 L2 y5 I6 r7 [& j: z0 G我昨天看文献，在《人干细胞培养》2007 一书中，发现书中说，常用SV129和C57 做MEF，晕。抓图如下
3 H0 i- ~! v& t( r7 q) T. {
作者: wxyWXY    时间: 2011-9-27 00:35

饲养层小鼠品系没有太大关系  只要feeder 的状态很好  养人的ips没问题的 我们实验室用过black6, cd1 和il4  状态好就可以
作者: 白巧克力    时间: 2011-10-10 19:10

STO,MEF都有，NAT PROTOC的一片文献上说，每一批次的feeder，Before use, it is necessary to test each batch of MEFs on at least two hESC lines for no less than three passages.
作者: bigsnow55    时间: 2011-10-11 23:34

白巧克力 发表于 2011-10-10 19:10
5 z& P1 L. E" X' o. {1 Y4 kSTO,MEF都有，NAT PROTOC的一片文献上说，每一批次的feeder，Before use, it is necessary to test each ba ...

0 N$ N5 P- h5 c( A1 ~$ [( J: h那工作量该多大啊！不过还是很有指导意义。
5 U: ?+ e! [- D  B4 _9 ^# j7 Q$ r. E4 p能否把全文传上来，谢谢！
作者: zhusealin    时间: 2011-10-13 11:37

我们用的CF1做饲养层养人的ES，是从上海斯莱克买的CF1小鼠
作者: zhusealin    时间: 2011-10-13 11:38

C57是用来培养鼠的ES，人的ES最好用CF-1
作者: 芊吖子    时间: 2011-10-13 11:55

提示: 作者被禁止或删除 内容自动屏蔽
作者: perillaleaf    时间: 2011-10-15 22:06

云里雾里！刚开始着手做，试剂都准备不全！学习！
作者: bigsnow55    时间: 2012-8-26 12:20

我前一段时间用C57做MEF，养人ES cells，结果证明，效果不错！
2 t' l! i% X! ^0 x7 `9 [但这段时间准备用昆明小鼠做MEF了，效果有待确认。
作者: bj123456    时间: 2012-8-26 12:37

回复 bigsnow55 的帖子# J* Y# B4 _; V) B0 Q' X# O

* ~0 O' |. P+ sMEF是可以自己做的，采用13.5天的孕鼠就可以。国内常用的就是ICR和昆明白。但是对人ips来说还是用CF-1的MEF会比较好好一些，他比前两个要稳定，但国内比较难买到。
作者: franklinhg    时间: 2012-8-26 12:54

专门有文章对feeder细胞的选择和不同遗传背景的来源的MEF做iPS的诱导的报道  多查文献  多看  自己主动一点 如果查不到文献可以去文献区求助。  
作者: bigsnow55    时间: 2012-8-27 21:35

回复 franklinhg 的帖子
( q0 Y7 @" E# `; b2 s; z; C
: ?  r# |/ a  E1 k如此说来，版块内就不需要求助帖子了...
作者: Jonathan    时间: 2012-8-30 10:40

可以用那种永生化的小鼠MEF，射线后可以用的



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