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标题: 人iPS培养可以用已经建立的小鼠MEF细胞系吗？ [打印本页]

作者: bigsnow55 时间: 2011-9-21 13:17 标题: 人iPS培养可以用已经建立的小鼠MEF细胞系吗？

看到上海细胞库有小鼠MEF细胞系，名称：BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纤维细胞（http://www.cellbank.org.cn/detail_1.asp?id=31），好像是转入了一些病毒什么的。
0 ]" G2 c: @( z. A* P. T请问如果想培养人的iPS或ES细胞，可以用这种已经建好的MEF细胞系吗？& m2 h: @" @- X( _4 Q4 ^
另外，iPS培养对于MEF的基因背景是否有要求，如BalB/C，C57或者昆明小鼠，有无区别？

作者: jj.jianjia 时间: 2011-9-21 14:11

你们要自己照辐射吗？我用的是公司买的用伽马射线照过的。

作者: huangcong1988 时间: 2011-9-21 14:48

回复 jj.jianjia 的帖子1 G+ i1 _9 y3 Y# f0 I- b0 x# f
: ^; e3 ^; o* T& h' l
你是说制作饲养层吧？用丝裂霉素C也行吧？

作者: jj.jianjia 时间: 2011-9-22 05:29

也是可以滴。。。

作者: bigsnow55 时间: 2011-9-22 15:15

谢谢大家！不知道有没有谁用细胞系做饲细胞层？:)
+ p0 L+ w- e0 s) v一般野生型MEF用第三代的，那永生化的细胞系用多少代比较合适呢？

作者: haijing12585 时间: 2011-9-22 23:01

回复 bigsnow55 的帖子 f2 k. p. v" x* Y3 [! Q

应该是可以的，有人也用STO细胞作为饲养层来培养iPS的

作者: bigsnow55 时间: 2011-9-22 23:51

haijing12585 发表于 2011-9-22 23:01
8 X2 o( r0 a7 H8 u) F& N! ~: H" j回复 bigsnow55 的帖子2 U+ a1 j% G5 l1 g4 v# @8 v# h
( }/ F' L6 J1 K5 ~* r) B I
应该是可以的，有人也用STO细胞作为饲养层来培养iPS的

谢谢！我刚才搜索看到了，在ATCC有这种细胞。

作者: juan880929 时间: 2011-9-23 09:43

可以买他们的，也可以自己做
做feeder最好的小鼠品系细胞是CF1，但是国内没有这种小鼠，所以一般ICR或者昆明白小鼠的胎儿成纤维细胞就可以，如果人的胚胎干细胞状态好的话，这两种品系小鼠的饲养层一般没有问题，没有必要花钱买细胞系

作者: bigsnow55 时间: 2011-9-23 22:51

回复 juan880929 的帖子
; q0 [& x( T e' z! n
谢谢juan880929！回答很专业！4 I1 q% @4 \! r; p" A- w
我现在在用C57 BL/6小鼠做MEF，不知道是否合适，请不吝指教，谢谢！

作者: guo6259 时间: 2011-9-23 23:20

感觉人的最好用CF-1做feeder。鼠的要求要低一些。ICR，昆明白都可以的。cf-1有一点自己扩增就行的。养满一个10cm盘用丝裂霉素C处理3h，冻起来能用好久的。但cf-1确实不好搞啊。

作者: bigsnow55 时间: 2011-9-24 09:48

回复 guo6259 的帖子, h( _: w- Z" _- V0 v! {

看来还是昆明小鼠比较现实，国内公司也有STO卖，但不知道效果如何，估计价格也不菲？
我也已配了一些C57的孕鼠，打算先试试看。

作者: bigsnow55 时间: 2011-9-25 11:04

juan880929 发表于 2011-9-23 09:43
2 G9 o8 {! U1 W% n0 ~9 n可以买他们的，也可以自己做
0 K' Z0 l) V! \: l; I做feeder最好的小鼠品系细胞是CF1，但是国内没有这种小鼠，所以一般ICR或者昆 ...

' m0 }( G. M" e* T2 w
juan880929，你好！很高兴与你讨论。4 }* H& I6 u* T: w5 _# l: U
你说一般用ICR或者昆明小鼠做MEF，请问有相关文献吗，能否发给我一份。
我昨天看文献，在《人干细胞培养》2007 一书中，发现书中说，常用SV129和C57 做MEF，晕。抓图如下

作者: wxyWXY 时间: 2011-9-27 00:35

饲养层小鼠品系没有太大关系只要feeder 的状态很好养人的ips没问题的我们实验室用过black6, cd1 和il4 状态好就可以

作者: 白巧克力 时间: 2011-10-10 19:10

STO,MEF都有，NAT PROTOC的一片文献上说，每一批次的feeder，Before use, it is necessary to test each batch of MEFs on at least two hESC lines for no less than three passages.

作者: bigsnow55 时间: 2011-10-11 23:34

白巧克力发表于 2011-10-10 19:10
" |1 E! s, I7 D/ x. ]' E* R# cSTO,MEF都有，NAT PROTOC的一片文献上说，每一批次的feeder，Before use, it is necessary to test each ba ...

8 V" a* c) a# U- X' t
那工作量该多大啊！不过还是很有指导意义。
能否把全文传上来，谢谢！

作者: zhusealin 时间: 2011-10-13 11:37

我们用的CF1做饲养层养人的ES，是从上海斯莱克买的CF1小鼠

作者: zhusealin 时间: 2011-10-13 11:38

C57是用来培养鼠的ES，人的ES最好用CF-1

作者: 芊吖子 时间: 2011-10-13 11:55

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作者: perillaleaf 时间: 2011-10-15 22:06

云里雾里！刚开始着手做，试剂都准备不全！学习！

作者: bigsnow55 时间: 2012-8-26 12:20

我前一段时间用C57做MEF，养人ES cells，结果证明，效果不错！
但这段时间准备用昆明小鼠做MEF了，效果有待确认。

作者: bj123456 时间: 2012-8-26 12:37

回复 bigsnow55 的帖子7 A! H2 L0 e' n
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MEF是可以自己做的，采用13.5天的孕鼠就可以。国内常用的就是ICR和昆明白。但是对人ips来说还是用CF-1的MEF会比较好好一些，他比前两个要稳定，但国内比较难买到。

作者: franklinhg 时间: 2012-8-26 12:54

专门有文章对feeder细胞的选择和不同遗传背景的来源的MEF做iPS的诱导的报道多查文献多看自己主动一点如果查不到文献可以去文献区求助。

作者: bigsnow55 时间: 2012-8-27 21:35

回复 franklinhg 的帖子. x% A" v4 r: j

如此说来，版块内就不需要求助帖子了...

作者: Jonathan 时间: 2012-8-30 10:40

可以用那种永生化的小鼠MEF，射线后可以用的

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