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标题: 神经干细胞怎么那么难养呢！！ [打印本页]

作者: jj2570782 时间: 2011-10-7 21:18 标题: 神经干细胞怎么那么难养呢！！

10.1前分离的SD乳鼠（24h内）全脑神经干细胞，分贴壁和悬浮分别进行培养，第一代的时候还蛮好的，但是床贷后生长极其的慢，完全不长，完全培养液（MDEM/F12，EGF,bFGF,B27，P/S）！求大虾们给点指点啊小弟急需扩增细胞

作者: angelyannan 时间: 2011-10-8 08:36

一般都是先悬浮培养传至一代以后才贴壁培养的，主要目的是使得贴壁培养的神经干细胞纯一些。。传代后生长慢可能有几个原因：首先可能是接种密度过低，接种密度过低的话，细胞之间联系较少可能不利于其生长：另外就是你在传代过程中是否对细胞造成了严重的损伤，细胞损伤严重后可能长不好的。另外你说完全不长时什么概念呢?一般文献上所说的一代和下一代之间的时间段大概是3~5天。不过这个时间也要根据你的取材来源决定，包括细胞密度也是一样的。如果细胞真的状态不好的话建议重新在养，同时也要根据自己的取材来源查找相应文献，然后注意以上几点，试试看~

作者: 青云之上 时间: 2011-10-8 08:46

回复 jj2570782 的帖子5 ], |( [0 m. |( t) c
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再加1%N2和谷氨酰胺试试，我那阵用得是icr乳鼠，就加了EGF、bFGF、B27、N2、谷氨酰胺，长得挺好的~~

作者: jj2570782 时间: 2011-10-8 14:32

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接种密度2x10的5次方，消化用的Sigma的ACCTUASE。分离的时候用ACCTUASE消化切碎的全脑50min，都没用什么大问题的啊！另外，我看过很多文献都是从原代就开始贴壁培养的，不存在先悬浮后贴壁培养的说法!

作者: angelyannan 时间: 2011-10-8 14:58

回复 jj2570782 的帖子# }: @9 M2 V* [/ ?! |

两种文献我都见过的，我多看过的还是使用第一代神经球用于贴壁的较多。可能我们的实验目的不一样，所以侧重点不一样吧~觉得你的接种密度应该没有什么问题~那不知道你的培养液ph值是否正常~

作者: wangfang 时间: 2011-10-28 19:59

第一代时状态还好证明你的培养液没什么问题，可能是你传代的时间不对，神经球对于环境很敏感，要求较高。如果传代太晚的话，神经球就会分化，因此传代后神经干细胞的数量已经大大减少了，另外，我做神经干细胞的原代时没有消化，剪碎后直接接种，我认为一开始用酶消化会对神经干细胞有很大的影响。

作者: jennyshy 时间: 2011-11-2 09:30

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想知道你贴壁是如何培养的，求protocoll

作者: jj2570782 时间: 2011-11-3 19:16

论坛里有，你搜一下！就是一个NSCs分离视频里面提到的% H6 M2 Q+ H( `# |) w" Q/ L

作者: catdoctor 时间: 2011-11-10 00:31

取原代的时候建议单纯机械法，消化对细胞的伤害比较大，另外，只取室下区的效果可能更好一点，我见同学这么养的，因子的质量可能也是问题，你换一个试试

作者: jj2570782 时间: 2011-11-10 21:31

机械法的伤害一定比酶的小吗？求证据？？？

作者: yangwy028 时间: 2011-11-10 22:28

神经干细胞喜欢集落生长，大到100微米就该传代了。它的贴壁性不是很好。是不是倒废液的时候把一些细胞倒掉了？另外进口的细胞因子的质量明显要优于国内的哦

作者: smkx 时间: 2011-11-10 22:38

检查你的B27是否有问题，不妨用再用下N2培养试试

作者: 天山飞鹤 时间: 2011-11-10 22:56

再加N2和谷氨酰胺试试，另外机械分离比消化酶损伤下，前提是要操作轻柔减少损伤

作者: 愤怒的小鸟 时间: 2011-11-18 21:17

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版主~~~~请教下哈，神经球的免疫荧光怎么做啊，看的都是PLL过夜处理玻片，收集到的NSC直接滴到玻片上，然后剩下就是免疫荧光的正常步骤，不知道还有什么要注意的没，麻烦版主赐教啊

作者: angelyannan 时间: 2011-11-21 13:21

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以前做过的，是收集大概直径为100um左右的神经球接种到PDL包被的孔板里面，贴壁培养大概6h以后做正常的免疫衣荧光。个人觉得贴壁培养的时间需要摸索，贴壁不紧的话后面免疫荧光步骤中细胞很容易被吸走。

作者: 愤怒的小鸟 时间: 2011-11-28 16:15

回复 angelyannan 的帖子; [ k# M) p* d8 o# E0 L( z
! @0 m7 _1 y: o
嗯嗯嗯 O(∩_∩)O谢谢

作者: caiwwcom 时间: 2012-2-28 08:56

angelyannan 发表于 2011-11-21 13:21 $ f- h. ~: t3 y' p. j F9 D
回复愤怒的小鸟的帖子
* p, w3 {% i) g. ?" I) p
9 p X/ s* Q7 S; C以前做过的，是收集大概直径为100um左右的神经球接种到PDL包被的孔板里面，贴壁培 ...

9 d5 T/ [- w' d8 S# o8 _4 f3 p
请问下直接用神经球吗，不需要单个细胞吗

作者: pipi168 时间: 2012-2-28 09:00

最好加神经生长因子，还有Vitc，这样就好多了

作者: angelyannan 时间: 2012-2-29 08:21

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我回答的是指神经干细胞的鉴定-nestin染色，而且我回复的帖子是说神经球的免疫荧光。当然要是贴壁的也可以的~看目的是什么了。

作者: 影像就是影响 时间: 2015-3-15 09:44

请问你用全脑培养神经干细胞，最后结果怎么样

作者: 漂流瓶 时间: 2015-8-25 17:48

回复青云之上的帖子1 z$ L( M6 `* d/ p) L; A& ]

你是说贴壁培养神经干细胞吗？加N2和LG效果会好一些？我一直在为贴壁培养发愁，总是长的不好。

作者: 撸大师撸大师 时间: 2016-6-7 08:51

神经干细胞的悬浮和贴壁培养可以通过不同的处理方法来完成，如果对培养瓶不做任何包被处理，干细胞就会贴壁生长。

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