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标题: 求教：成纤维细胞原代状态不好的原因 [打印本页]

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-16 16:36 标题: 求教：成纤维细胞原代状态不好的原因

本帖最后由牙牙丫丫123 于 2011-10-16 16:44 编辑 $ y- B1 U/ z! [8 R+ P
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我养的是猪的胎儿成纤维洗吧，原代培养方法是0.25%胰酶消化，终止离心后接种，10%FBS的培养液，原来用这种方法培养细胞生长很好，可是这次培养时，第二天细胞长出来就特别老，而且细胞全是小黑点，请问这是什么原因造成的……是血清或者培养液PH值的问题吗？; H% J. {' b _' l% p; S

作者: wangshumin12311 时间: 2011-10-16 17:19

这细胞救不回来了，，，重新来过，，，看有没有支原体或者细胞受啥罪了，，，血清正常的话不会出现这情况，，，，话说你是哪个单位，，，做猪的？

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-16 19:44

回复 wangshumin12311 的帖子
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您觉得这更像是支原体污染？我是东北农业大学的，我们实验的主攻方向是猪

作者: 军医 时间: 2011-10-17 00:35

是不是抗生素加多了？

作者: 星移龙一 时间: 2011-10-17 12:54

我们实验猪的用的都是15%~20%的FBS，原代都很好啊，传代生长也很好，不知是不是这个问题。

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-17 16:01

回复军医的帖子/ o' _9 i8 g( x$ x. G
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我加的正常抗生素用量

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-17 16:01

回复星移龙一的帖子5 v. @5 O$ P2 @0 ~0 L

能请问一下您是怎么做原代细胞培养吗？# k5 i7 `" Y" Z" e3 g, k

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-17 16:08

回复星移龙一的帖子
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还有，我这次使用的是10%的培养液，有没有可能是血清质量本身不好，然后再加上血清浓度低，导致细胞营养不良呀……然后细胞就长成这样了: p1 C/ }0 r& z% a* h6 v7 e% ~. g

作者: 军医 时间: 2011-10-17 16:43

回复牙牙丫丫123 的帖子

我们用10%的血清养原代也挺好的，是不是时间长了，迁出的细胞长的太密了，生长抑制了

作者: 星移龙一 时间: 2011-10-17 19:23

回复牙牙丫丫123 的帖子

胎儿的取部分组织，剪碎后涂板培养，
成体的一般是耳源的，将毛刮去后，剪碎涂板。

作者: 星移龙一 时间: 2011-10-17 20:04

我没有权限接受你的好友申请，对不起！！！

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-17 20:21

回复星移龙一的帖子
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那意思是你们使用的是贴壁培养法？不是酶消化法？0 h* O8 z+ J/ S5 o

作者: 星移龙一 时间: 2011-10-18 09:15

回复牙牙丫丫123 的帖子
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恩

作者: narajie 时间: 2011-10-19 14:38

第二幅那种黑点应该是血清的问题吧，但是好像影响也不太大...之前我养人的成纤维也这样过...

作者: huangcong1988 时间: 2011-10-20 09:21

我觉得如果你最下面那个图是在高倍镜下看的话，里面猪成纤维细胞还行，但是低倍镜下，那细胞密度就有点小了。上面几幅图里面应该是被污染了，你说有小黑点，是不是黑胶虫？在细胞之间吗？还有，看图我觉得你的细胞不太均匀，消化以后一定要吹打均匀了再分装，不然细胞不均匀，在细胞密度稀的地方肯定会长虫子的，而且你可以试着提高DMEM中FBS含量，用20%或许效果会好点。图中的小黑点，不出意外的话，应该是黑胶虫

作者: dandan9230 时间: 2011-10-20 16:34

可以检测一下支原体，PCR法很快的

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-20 17:15

回复 huangcong1988 的帖子3 R0 B) } [3 M- V9 p% K4 b) {/ X
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请问黑胶虫会动吗？我这个小黑点是长在细胞表面的……

作者: huangcong1988 时间: 2011-10-21 14:56

回复牙牙丫丫123 的帖子

可以的，你转高倍镜下看，可以看到细胞之间的小黑点，是能看到它移动的

作者: liuyul03 时间: 2011-10-24 08:35

从你的图片来看，首先你在做细胞接种时没有混匀，有的地方过于密集，形成复层，而有的地方还没长。最后一张图片还可以，但也有老化迹象啦。

作者: wangshumin12311 时间: 2011-10-24 16:00

回复牙牙丫丫123 的帖子% y. E( g/ T; F2 d% C$ o+ J4 E

天呐，没想到随便都能碰到母校的学生，，你是刘忠华老师那边的吧，，，没关系，成纤维细胞重新做，状态不好就扔了

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-24 16:50

回复 wangshumin12311 的帖子

呵呵……是呀……

作者: liuhuijing 时间: 2011-10-29 10:53

回复星移龙一的帖子! G1 K2 X: u6 t2 X/ B

想请教一下具体养猪成纤维细胞的做法，我们这边还没养过，谢了。。。。

作者: zhangjinami 时间: 2011-10-30 09:19

如何鉴别一个细胞克隆
如何终止胰酶消化用胎牛血清8 W* c: _+ o3 H9 F1 D: f
如何分离

作者: smartyyu 时间: 2012-9-26 22:23

怎么老有人说黑胶虫，不存在的东西吧

作者: huangcong1988 时间: 2012-9-27 10:36

回复 liuhuijing 的帖子+ C2 r* Y0 F' c' z& X: B) l
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刘会敬？这个还是很好养啊

作者: goohongzi 时间: 2012-11-1 13:17

看着这个一团乱糟糟，不是支原体之类的污染，就是细胞长的太过了，按理说，原代细胞最容易培养了。千万不要让它长过了，或者污染了。建议原代培养时常规加杀支原体的药物和双抗

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