干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 求教：成纤维细胞原代状态不好的原因 [打印本页]

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-16 16:36 标题: 求教：成纤维细胞原代状态不好的原因

本帖最后由牙牙丫丫123 于 2011-10-16 16:44 编辑

我养的是猪的胎儿成纤维洗吧，原代培养方法是0.25%胰酶消化，终止离心后接种，10%FBS的培养液，原来用这种方法培养细胞生长很好，可是这次培养时，第二天细胞长出来就特别老，而且细胞全是小黑点，请问这是什么原因造成的……是血清或者培养液PH值的问题吗？; A- F# y1 ^8 N) H$ g$ C

作者: wangshumin12311 时间: 2011-10-16 17:19

这细胞救不回来了，，，重新来过，，，看有没有支原体或者细胞受啥罪了，，，血清正常的话不会出现这情况，，，，话说你是哪个单位，，，做猪的？

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-16 19:44

回复 wangshumin12311 的帖子

您觉得这更像是支原体污染？我是东北农业大学的，我们实验的主攻方向是猪

作者: 军医 时间: 2011-10-17 00:35

是不是抗生素加多了？

作者: 星移龙一 时间: 2011-10-17 12:54

我们实验猪的用的都是15%~20%的FBS，原代都很好啊，传代生长也很好，不知是不是这个问题。

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-17 16:01

回复军医的帖子, v' m6 w z+ O* B
( g/ W; T% m0 A b2 c) o4 N" {+ a* a; X* B
我加的正常抗生素用量

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-17 16:01

回复星移龙一的帖子% i! m4 ]* M9 M; r. Z
! z# b0 q$ \& ^$ u% U3 Y+ L
能请问一下您是怎么做原代细胞培养吗？

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-17 16:08

回复星移龙一的帖子

还有，我这次使用的是10%的培养液，有没有可能是血清质量本身不好，然后再加上血清浓度低，导致细胞营养不良呀……然后细胞就长成这样了

作者: 军医 时间: 2011-10-17 16:43

回复牙牙丫丫123 的帖子2 A5 L( q8 m, a- d# m9 b
, X" H) a2 {* z
我们用10%的血清养原代也挺好的，是不是时间长了，迁出的细胞长的太密了，生长抑制了

作者: 星移龙一 时间: 2011-10-17 19:23

回复牙牙丫丫123 的帖子0 i3 H7 s' ^. x2 ^0 W# L% Z
$ x0 ]0 L. J+ g% @7 R' {0 H4 q
胎儿的取部分组织，剪碎后涂板培养，
成体的一般是耳源的，将毛刮去后，剪碎涂板。

作者: 星移龙一 时间: 2011-10-17 20:04

我没有权限接受你的好友申请，对不起！！！

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-17 20:21

回复星移龙一的帖子
; X* S8 @& x' b& a' i
那意思是你们使用的是贴壁培养法？不是酶消化法？

作者: 星移龙一 时间: 2011-10-18 09:15

回复牙牙丫丫123 的帖子

恩

作者: narajie 时间: 2011-10-19 14:38

第二幅那种黑点应该是血清的问题吧，但是好像影响也不太大...之前我养人的成纤维也这样过...

作者: huangcong1988 时间: 2011-10-20 09:21

我觉得如果你最下面那个图是在高倍镜下看的话，里面猪成纤维细胞还行，但是低倍镜下，那细胞密度就有点小了。上面几幅图里面应该是被污染了，你说有小黑点，是不是黑胶虫？在细胞之间吗？还有，看图我觉得你的细胞不太均匀，消化以后一定要吹打均匀了再分装，不然细胞不均匀，在细胞密度稀的地方肯定会长虫子的，而且你可以试着提高DMEM中FBS含量，用20%或许效果会好点。图中的小黑点，不出意外的话，应该是黑胶虫

作者: dandan9230 时间: 2011-10-20 16:34

可以检测一下支原体，PCR法很快的

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-20 17:15

回复 huangcong1988 的帖子

请问黑胶虫会动吗？我这个小黑点是长在细胞表面的……

作者: huangcong1988 时间: 2011-10-21 14:56

回复牙牙丫丫123 的帖子, h5 E2 @8 Y1 n5 l- ~) B4 [

可以的，你转高倍镜下看，可以看到细胞之间的小黑点，是能看到它移动的

作者: liuyul03 时间: 2011-10-24 08:35

从你的图片来看，首先你在做细胞接种时没有混匀，有的地方过于密集，形成复层，而有的地方还没长。最后一张图片还可以，但也有老化迹象啦。

作者: wangshumin12311 时间: 2011-10-24 16:00

回复牙牙丫丫123 的帖子; a: r* U1 T6 i

天呐，没想到随便都能碰到母校的学生，，你是刘忠华老师那边的吧，，，没关系，成纤维细胞重新做，状态不好就扔了

作者: 牙牙丫丫123 时间: 2011-10-24 16:50

回复 wangshumin12311 的帖子) F1 t3 o) D/ J O

呵呵……是呀……

作者: liuhuijing 时间: 2011-10-29 10:53

回复星移龙一的帖子
3 C, v0 Z- x. O3 y! B K
想请教一下具体养猪成纤维细胞的做法，我们这边还没养过，谢了。。。。

作者: zhangjinami 时间: 2011-10-30 09:19

如何鉴别一个细胞克隆
如何终止胰酶消化用胎牛血清% i& @1 Z# T0 H
如何分离

作者: smartyyu 时间: 2012-9-26 22:23

怎么老有人说黑胶虫，不存在的东西吧

作者: huangcong1988 时间: 2012-9-27 10:36

回复 liuhuijing 的帖子5 S; k% p5 w# r8 |" J% b

刘会敬？这个还是很好养啊

作者: goohongzi 时间: 2012-11-1 13:17

看着这个一团乱糟糟，不是支原体之类的污染，就是细胞长的太过了，按理说，原代细胞最容易培养了。千万不要让它长过了，或者污染了。建议原代培养时常规加杀支原体的药物和双抗

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)