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标题: 关于培养基 [打印本页]
作者: 1301918986    时间: 2011-10-18 09:19     标题: 关于培养基

最近我们实验室的培养液好像有问题，培养的细胞增殖很慢，而且细胞形态也有些变化，有些比较娇气的细胞根本就养不活。我们怀疑可能是实验室的水有问题，我想请教的是配置培养液的水对细胞的影响有多大，这个水的要求是什么？
作者: feihua011    时间: 2011-10-18 09:33

感觉培养基的水对不同要求有所不同，你要高温灭菌培养细菌之类的普通的双蒸水（过滤一次）就可以了，但要求高的最好用去离子水，那个机器的柱子是耗材，过一定的水量就应该换，要不然就不起作用了。
作者: 1301918986    时间: 2011-10-18 09:37

恩，我们之前一直用的是超纯水，但是最近治水的机器出问题了水不能用了。所以我们就从别的地方那水，但是配出来的仍然有问题，可是人家用那水配出来就好着呢。因此，现在我们也不知道是哪个环节出了问题。
作者: meister    时间: 2011-10-18 10:32

双蒸水肯定是不好的， 必须超纯水
作者: 青云之上    时间: 2011-10-18 11:26

一般应该是用超纯水，你测下酸碱度，看看pH是否正常~~~
作者: 牙牙丫丫123    时间: 2011-10-18 14:58

本帖最后由 牙牙丫丫123 于 2011-10-18 14:59 编辑
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我们现在也遇到这种问题了，细胞长的慢不说，还容易老化，细胞上全是小黑点……培养液用的是买回来的成品，现在变了的是我们新开了一瓶血清……不知道血清是不是会影响……
作者: 1301918986    时间: 2011-10-18 16:10

我们用的就是超纯水啊，真的是很苦恼啊。! f2 L5 d! a4 f% T% ~# ]6 c/ x# m9 ]
作者: inno    时间: 2011-10-18 16:53

牙牙丫丫123 发表于 2011-10-18 14:58 * ?* |! _! `4 {4 s5 J; q3 D# _- m
我们现在也遇到这种问题了，细胞长的慢不说，还容易老化，细胞上全是小黑点……培养液用的是买回来的成品， ...

# b# R+ K3 U! ~' M# h, P这个也是可以测试一下血清的，如果黑渣过多就是血清有问题了
作者: 牙牙丫丫123    时间: 2011-10-18 16:55

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一般你们是怎么测血清的？
作者: inno    时间: 2011-10-18 16:57

回复 牙牙丫丫123 的帖子$ H4 w  j" H3 u2 }. k

" H* Z9 u6 {' V0 O+ X- F+ U$ Q  E% K. Y就是很简单的在配置培养基之前，拿个35mm的小皿测试，之前遇到过黑渣多的，直接弃掉了。一般是无杂质清亮的。
作者: 牙牙丫丫123    时间: 2011-10-18 16:58

回复 inno 的帖子: v# w$ O$ L& W$ b( f1 s
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你说的是直接看血清吗？还是用血清来养细胞？
作者: inno    时间: 2011-10-18 17:00

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. l9 ?5 D6 x7 s5 s直接看的，如果血清黑渣多，配置的培养基当然黑渣也多。
作者: andylee824    时间: 2011-10-20 09:45

我们买回来的血清都是要离心后分装用；还有配置时要用滤器。
作者: dandan9230    时间: 2011-10-20 16:33

我们是超纯水，灭菌后，再过滤
作者: 1301918986    时间: 2011-10-25 08:36

我们现在应得超纯水并不灭菌，而血清用之前都过滤的。我想问超纯水灭菌是为什么呀？
作者: 1301918986    时间: 2011-10-25 09:14

对了，你们说的血清里面的黑渣，在显微镜下观察它会动吗？
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作者: yizuiqiannianga    时间: 2011-10-25 09:46

用超纯水试一下，如果还不行你检查一下是不是支原体的原因啊
作者: 1301918986    时间: 2011-10-25 14:18

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恩，最近的的制水机出问题了，水的电阻率达不到18.2，这个有没有什么影响啊
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作者: barley    时间: 2011-10-25 17:09

可以检测个内毒素啊，如果有内毒素的问题，容器就都要换了
作者: trl137    时间: 2011-10-30 22:27

既然有不确定的环节，那就应该考虑多种因素。我们一般都用超纯水配液体；配置培养液所用的各种试剂性质要稳定；测定配好的液体的渗透压等等
作者: 1301918986    时间: 2011-11-2 11:10

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请问你们渗透压怎么测定的啊？
作者: trl137    时间: 2011-11-2 13:40

用渗透压测定仪，然后和相对标准的做比较
作者: 1301918986    时间: 2011-11-3 11:33

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呵呵，谢谢啊。我们好像一直没测过渗透压。
作者: 827914734    时间: 2011-11-9 12:43

我们一般都是用超纯水配制培养液，不用高温灭菌，只是配制完成之后过滤，不过过滤时一定要注意滤膜的完整性，而且每次滤纸的使用不能太多，过滤的培养基较多时滤膜效果会降低。9 T7 M% p4 V: d
另外血清的影响也会比较大，如果感觉有问题，最好多用几个批次的血清尝试一下，不管国产还是进口，批间差异都是存在的
作者: 天枰2012    时间: 2011-11-13 16:40

是否可能是培养基体系到问题？还要注意生产日期，快过期到培养基也会有影响到。或者测测PH
作者: zzc2211    时间: 2011-11-14 01:23

此问题有多种可能原因：1，血清，国产血清和进口血清有区别，进口血清差异也很大；2，培养液，在培养液里除了营养物质还有最重要的缓冲体系，如缓冲体系出问题，PH变化，细胞根本长不好。另外，培养箱的二氧化碳是构成缓冲体系的组成部分，需检查。用超纯水（去除了很多不可控的各种离子）陪配制培养液，再过滤。
作者: 1301918986    时间: 2011-11-14 14:31

呵呵，谢谢各位的建议，以后会多加注意各个方面的。
作者: 1301918986    时间: 2011-11-14 14:32

呵呵，谢谢各位的建议，以后会多加注意各个方面的。
作者: 1301918986    时间: 2011-11-14 14:36

呵呵，谢谢各位的建议，以后会多加注意各个方面的。
作者: 1301918986    时间: 2011-11-14 14:43

呵呵，谢谢各位的建议，以后会多加注意各个方面的。
作者: 1301918986    时间: 2011-11-14 14:50

呵呵，谢谢各位的建议，以后会多加注意各个方面的。
作者: bobo198666    时间: 2011-11-14 14:52

我们是买血清赠送DMEM，打开直接配了用了，可以买现成的，避免了水的问题
作者: 1301918986    时间: 2011-11-15 08:29

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呵呵，这样挺好的，可以避免很多问题啊。
作者: 轩辕之客    时间: 2011-11-15 08:40

之前我们也一直用超纯水配培养基，但长时间就发现不怎么好用了。现在我们大部分都是直接买现成的培养基了，而且不贵，建议楼主买一瓶试试，用买的培养基和自己的培养基作个对照，就发现是不是培养基的问题了。
作者: 1301918986    时间: 2011-11-15 08:45

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  e# D8 k; v# E  G2 q买现成的培养基不贵吗，我还以为会很贵呢
作者: 轩辕之客    时间: 2011-11-15 11:46

本帖最后由 轩辕之客 于 2011-11-15 11:47 编辑 % S8 s+ C$ o. W' i" G
1301918986 发表于 2011-11-15 08:45 1 T3 E; H+ ^' i% H) s; s
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买现成的培养基不贵吗，我还以为会很贵呢
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# q! S0 r- O: x, K1640，DMEM-H，我们实验室买的Thermo的，500ml（分装好的，可以直接用）都只需要50元，一点不贵啊
作者: 1301918986    时间: 2011-11-16 08:42

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" |7 F- j/ T+ m7 M# H呵呵，那这个价格还好。O(∩_∩)O谢谢
作者: yucl19680911    时间: 2011-11-17 07:56

我们采用的是反渗透的纯水，进行超滤，然后蒸馏。不过有时培养基的粉沫也会出现问题，如果是换了批次或品牌的话，高度怀疑！这种事情亲身经历过。
作者: 1301918986    时间: 2011-11-17 10:46

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- K/ Y9 g- |4 K4 R5 z: o3 k0 m$ \4 ^9 l: U  a7 j4 E
我们知道批与批之间肯定有差异，但是不知道差异有多大？
作者: songxinxing    时间: 2011-11-18 10:31

超纯水配制培养基，搅拌均匀调节PH至6.8-7.0，0.22或者0.1um滤膜过滤一次，一般过滤完PH会上升0.2左右，再有问题那就要检测是否是支原体污染了。。。
作者: 1301918986    时间: 2011-11-21 09:27

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3 r3 @+ }- a* M+ e' h% {8 Q. `如果是支原体污染的话，那就比较麻烦了。



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