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标题: MEF feeder 的问题 γ or MMC [打印本页]

作者: 白巧克力 时间: 2011-10-22 22:08 标题: MEF feeder 的问题 γ or MMC

大家做feeder的MEF是用γ射线照射还是用丝裂酶 C啊？4 k8 o. }/ r/ O6 a1 S& O. N! _
丝裂酶C对细胞的毒性不小，但是国外文献大部分都是用丝裂酶C，不用γ射线，国内的话，是不是有条件就用射线呢？, X# [" e/ E9 Y) |; X: p! Y4 o
总感觉吧MEF拿到医院，感觉再包好也不放心。。。。。。
大家什么意见啊？

作者: huangcong1988 时间: 2011-10-23 09:24

自己用丝裂酶C处理吧，操作很简单的，用射线处理，度很难掌握

作者: majing217 时间: 2011-10-23 10:14

我正常做feeder就用丝链霉素C

作者: chutu 时间: 2011-10-23 10:35

有γ射线装置的话，还是辐照处理省事。现在还有代替γ射线的x-射线辐照仪，更好用

作者: guo6259 时间: 2011-10-23 12:03

用丝裂酶素C吧，经济有实惠。
用医院买的用于抗肿瘤的就行的。
效果也很好的。用海正的就不错。

作者: zhusealin 时间: 2011-10-23 13:47

有条件还是用辐照比较好。一次可以处理一批冻存，也不用担心有残留毒物。我们就是把需要辐照的MEF消化下来都装在一个50ml离心管里，拿去辐照。如果路途比较远，就放4度运输。一个50ml离心管装10的9次方MEF，辐照完了就冻存，用的时候再复苏。

作者: 白巧克力 时间: 2011-10-24 13:02

回复 zhusealin 的帖子

谢谢！！
问几个问题：
1. MEF冻存的密度是多少？p3代的细胞应该不少，收集起来去照，照完拿回来要计数分装冻存的吧？具体是多少呢？
2. MEF做feeder做人的ips铺板密度是多少？+ Z3 p6 ^6 a: f m2 b
谢谢！

作者: 白巧克力 时间: 2011-10-24 13:03

回复 guo6259 的帖子6 F; j# G5 ?3 m5 x& B
a$ f7 R) p6 P+ o: t7 E* |; X
第一天铺feeder，让其贴壁，第二天加丝裂酶C，反应多久？要用PBS还是DPBS洗，洗2遍就可以加入MEF培养基放培养箱不用管了吧？

作者: 刘森泉 时间: 2011-10-24 18:53

我们实验室一直用丝裂酶C处理的，感觉还好啊，就是注意MEF状态要好，可以让你作feeder一段时间的，要是状态不好那对你的目的细胞效果就很差了。

作者: ligangtiancai 时间: 2012-3-18 23:17

回复白巧克力的帖子, S/ ]9 X7 r( z

1.冻存密度取决于后面iPS铺板的密度，例如如果一直是T25Flask 进行1:6传代的话，可以一支冻300万（3X10的6次方），然后每次复苏2支就行，冻存前计数
2. 推荐密度为75万/cm2，考虑到复苏率的问题，推荐铺85-90万/cm2

作者: mohanmud 时间: 2012-3-20 00:25

我们常规用Mitomycin C，但是记得处理完后至少用PBS洗5遍，尽量洗干净。

作者: michael1013 时间: 2012-3-20 18:09

我们的Feeder为 SNL
然后用MMC处理后保存
(日本京大 ips中心推荐用SNL做人ips feeder)

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