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标题: 请教下关于老鼠ES细胞培养 [打印本页]

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作者: iamxuchen    时间: 2011-10-23 00:08     标题: 请教下关于老鼠ES细胞培养

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这是培养的ES细胞一传二后的第二天的照片，感觉比较小1 D5 [9 `0 U% _1 z& ^
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这是第三天的ap染色情况，因为第一次做这个不是很有经验，想问下这个情况是大部分都分化了吗？
' T) ]# e/ L- n[attach]34643[/attach]/ L1 _" x+ ^6 I- }
这是另外一瓶的情况染色明显比前面那瓶深，但形态也不是很好，这跟染色有关系还是细胞本身的问题？

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作者: zhusealin    时间: 2011-10-23 14:04

mES传代的时候要消化成单个细胞，不然就会分化

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作者: 牙牙丫丫123    时间: 2011-10-23 15:21

看照片感觉有一些细胞好像分化了……而且第二张AP染色的图片显示好像在显色后你没怎么洗干净……所以在饲养层上都有一些淡淡地紫色

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作者: iamxuchen    时间: 2011-10-23 17:58

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牙牙丫丫123 发表于 2011-10-23 15:21
2 D# \" \# z: s% f' U, [看照片感觉有一些细胞好像分化了……而且第二张AP染色的图片显示好像在显色后你没怎么洗干净……所以在饲养 ...

  H( w$ [, d' @

' n! v0 S5 W8 p  `6 C7 x[attach]34652[/attach]谢谢，这又是一张照相机拍下来的第一张AP染色那瓶的细胞，染上色的不多，感觉分化了基本，主要还是要把细胞传代时吹成单个哦？mef的密度有什么要求不？长的太满会不会影响啊，AP在干细胞染色的原理是什么啊？为什么会出现一个细胞染色集中在一边？谢谢~偶比较新手

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作者: 牙牙丫丫123    时间: 2011-10-23 18:27

回复 iamxuchen 的帖子
& l* o, _3 v& d4 v
. _  p& T! }8 p4 Q' ]0 ]' R+ v我不太清楚你用的是哪个公司的试剂盒，有一些试剂盒是需要过夜染色的。9 p+ N. ^" r  p- E. }* R
传代时是否消化成单个细胞这一说法有很多人都不一致，这主要看你们一直用什么方法培养，说消化成单个细胞是因为mES可以支持消化成单细胞的传代方法。! Q( Z. I: ?& g) k
Feeder的密度不要太大，太大了不利于ES的生长。
$ ]) `; U% V( ^* j而且ES传代时机要把握好，不要等ES长的太大了在传代，这样容易引起分化。6 Y$ K/ G# T( t% C3 Y
AP染色的原理是：细胞胞浆中的碱性磷酸酶在pH9.0－9.8缓冲液中，能水解磷酸萘酚钠产生α萘酚，后者与一种稳定的偶氮盐偶联染液，沉着与细胞浆中。
7 S- F: J% u: {" \染色的时候着色细胞集中在一边有两种可能性：1、这些细胞没有洗干净2、克隆中仅有一部分细胞分化了，其余的细胞还没有分化，所以呈AP阳性

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作者: subenjinwo    时间: 2011-10-23 19:12

朋友，请问这是什么细胞？

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作者: iamxuchen    时间: 2011-10-23 20:20

回复 牙牙丫丫123 的帖子8 G1 b5 z8 y9 L* y' p  ]8 L8 z8 F2 j
" l; |. t& ?- ?. T, R; a
谢谢！学习到了

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作者: llecstem    时间: 2011-10-24 10:06

回复 牙牙丫丫123 的帖子  x- m4 ^$ K6 Q7 ]
* X5 h$ W" ~% X% d+ X
你好，请教一下，mES细胞的单克隆生长的很立体，边缘也很清晰，是不是应该就是没有分化？边缘出现了泡状的细胞同时扁平了就是分化了吧？谢谢！

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