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标题: 逆转录病毒在293T细胞中包装，一般多少时间收病毒啊？ [打印本页]

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作者: 刘森泉    时间: 2011-10-28 14:20     标题: 逆转录病毒在293T细胞中包装，一般多少时间收病毒啊？


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逆转录病毒在293T细胞中包装，一般多少时间收病毒啊？已经两天了，293T细胞看起来状态已经不行了，可是我的备转染细胞还没长好啊！能不能放到第三天再收病毒转染啊，还是需要今天收病毒，冻存起来？冻存对病毒滴度影响很大吗？谢谢！

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作者: shylook    时间: 2011-10-28 15:04

状态都会不好的# m/ P+ a' S# ~% f4 D
培养基黄了也不要去理会
1 Y2 B3 ?5 O. f6 M( V: h9 n" k7 l
7 N  F, S' d! N一般转染之后48h收 有时也40h收( e% Y- u3 Q1 o1 x- h; ~+ K& g
很多protocol24h  48h分别收一次
" G0 W( g6 `" i, r$ i; D# X, N$ a0 ~" d+ {+ y; s$ q1 E
个人觉得48h收足够% u, D; d  f7 m1 R  D) {( M2 \. ]

9 ~, q% k; G" U; j$ U' J- H, U你可以冻起来（分装）也可以放4度几天再测滴度: O/ A4 a4 h! m1 V( H
本人是分装-80

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作者: lemma710    时间: 2011-10-28 15:53

48h 72h收病毒，分开放，等测了滴度在决定要不要混起来。, o/ W; q1 A5 C: r1 ^4 ^
病毒你可以先收了，放在4度，一两天是没有问题的，以后放最好分装放在-80。7 J: W1 a7 W$ ]+ v
-80是会降低一些病毒活性的，但长时间放4度降低的更多的~

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作者: 刘森泉    时间: 2011-10-29 09:48

谢谢各位哈。

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作者: yangpan521    时间: 2011-10-29 10:05

我们这一师兄将病毒液放入了 -80度，被老师骂了一顿，老师说病毒液不能存放，应现收先用。如果细胞没备好，就把病毒液扔了 。请求说法

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作者: tianlanghehb    时间: 2011-10-29 10:32

72h收是没有问题的，保存一般都是放-80度。

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作者: shylook    时间: 2011-10-29 10:54

yangpan521 发表于 2011-10-29 10:05 : ]2 `8 ^% J/ l6 k5 l! W9 P( k
我们这一师兄将病毒液放入了 -80度，被老师骂了一顿，老师说病毒液不能存放，应现收先用。如果细胞没备好， ...

' w! Z7 c" U2 p2 i5 E
只能说你老师比较死板
3 v. P  S3 c) O+ T/ l平时包的话 转染48h收
% U8 t! R0 T$ Y8 E2 v. V% Q' X转染后加15ml DMEM
( `. O3 F# }; q4 t; Z收的时候能收14ml
& H; H, [! ]3 D% Q; O分装1ml/每管5 p% b+ M+ X0 R, z' O
-80保存
6 K. h5 W' f3 a3 K' E: f4 L半年以上
( \. C. R( f) w7 C" c/ H感染10cm dish 只用1ml病毒 9 B8 L% X; d# Z/ q
puro筛时 感染效率90%以上

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作者: guo6259    时间: 2011-10-30 12:22

很负责的说是48h和72h各一次。但关键是保证293T在转染时是70%融合的。要不72小时就长的太密了。" o' D' \4 k  K. H' x/ j! n8 S
293T是关键！！. O7 ^# d; A- W2 i. q1 e
至于收 的病毒-4度放一个星期也没什么问题。

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作者: 王乾    时间: 2011-10-31 12:23

病毒液一般转染完8-12小时换液，一般12小时就已经有病毒产生了，收病毒的时间一般是换完液36-48小时，也有人推荐36小时收一次，72小时再收一次混在一起用。另外病毒是可以冻存的，一般是液氮速冻，溶的时候好像速溶和慢溶都行，我测过冻前和冻后的滴度区别，一般冻融一次滴度会降低为原来的一半。病毒感染一般的细胞滴度一般不是问题，但感染ES滴度就不要太低，怎么也得10的6次方吧。

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作者: rexhz    时间: 2011-10-31 14:29

你们的慢病毒都是用原液做吗？有做慢病毒浓缩的没有?

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作者: zpzp0312    时间: 2011-11-4 09:36

回复 yangpan521 的帖子
2 _$ e) N# p$ K' y+ g" g
3 i8 L, I% z' O  ?; d可惜了，你老师不懂

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作者: huangcong1988    时间: 2011-11-4 12:33

逆转录病毒转染细胞，细胞生长肯定会受到影响的
; N& Z/ q% \/ S0 T但是，如果要收集病毒上清的话，就不能考虑细胞状态问题的
  u- j9 z% r& W48h之内不要换液（除了刚转染后6h的时候需要换液一次）
4 _# A  k4 L! r( h8 F: d48h收上清就行
% i7 n% [+ l% g/ e8 _9 ^有的说72h收也行，我感觉不太好，因为我48h收的时候培养基已经全黄了

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作者: huangcong1988    时间: 2011-11-4 12:34

回复 王乾 的帖子
, M/ e4 H( Q! T& a) @8 n- l4 c, }! G
不是吧？冻存一次滴度降低一半？是20%左右吧？怎么会那么高呢？

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作者: huangcong1988    时间: 2011-11-4 12:36

回复 yangpan521 的帖子5 }9 z7 L# j8 K, z, m# j/ D
4 y! H9 G$ y% f( Y' Q
病毒上清是能东村的，只是冻存后滴度会有降低

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作者: trl137    时间: 2011-11-5 23:27

一般是48h,72h各回收一次病毒。你在做转染时，一定要控制好细胞的密度，这直接关系到转染效率。

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作者: 囡囡    时间: 2012-2-23 22:24

一般48h、72h收病毒，如果到72h可以先收了，放4度一个星期都可以做，放-80能保存一个月，但滴度要降一半

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