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标题: 关于PEG8000的配制问题 [打印本页]

作者: huangcong1988 时间: 2011-10-30 22:21 标题: 关于PEG8000的配制问题

不知道40%的PEG8000怎么配制，有的说是直接用去离子水配，也有说用去离子水配后加氯化镁，到底是怎么配制呢？而且PEG8000是用来浓缩核酸的么？

作者: john7812x 时间: 2011-10-31 08:52

聚乙二醇(PEG)在不同的盐溶液中可以结合形成孔径不同的网状结构,重组质粒是超螺旋的双链闭合环状DNA,它们与RNA 、线状DNA等其他杂质分子在PEG中的沉降系数不同。通过高速离心，使沉降系数较高的重组质粒DNA沉淀下来，而其他杂质分子和不同构象的质粒DNA分子被网状结构阻隔，从而纯化质粒。: S9 n2 `1 f! s

作者: huangcong1988 时间: 2011-10-31 10:53

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哦，纯化RNA也行是吧？那40%的PEG8000该怎么配呢？

作者: zhusealin 时间: 2011-10-31 13:18

浓缩核酸的不太清楚。我们是用的50%PEG 1500做细胞融合用的，配的时候就用PBS溶解，高压灭菌

作者: huangcong1988 时间: 2011-10-31 13:27

回复 zhusealin 的帖子0 E6 Q6 ]3 u) w! W

是，PEG也用于细胞融合

作者: john7812x 时间: 2011-11-1 09:30

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PEG8000可以纯化RNA，如网页中所述：http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/16186.html6 o2 J1 @: z- }: W
但是，我没有用过PEG8000提取RNA，我用试剂盒提取小量RNA，或用Trizol提取大量RNA。
% A. c Y( |+ E' n0 T
40%（w/v）PEG8000 用去离子水配，如文件中黄色部分所示：! L: K5 @+ j9 E2 g, I
[attach]34950[/attach]

假如你打算用PEG8000 提取RNA，建议用DEFC处理过的去离子水来配制。

作者: huangcong1988 时间: 2011-11-1 10:49

回复 john7812x 的帖子+ Y; D! n) A) D: B
3 Q% l. W/ t" t
不是提RNA，是浓缩，就是已经收集的慢病毒上清，想用PEG8000纯化一下，谢谢

作者: huangcong1988 时间: 2011-11-1 13:41

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$ W- ~0 `. b) U
有道理，慢病毒上清要纯化的话呢？慢病毒是RNA+外壳（蛋白），那去离子水是应该用DEPC水处理一下

作者: john7812x 时间: 2011-11-1 19:47

回复 huangcong1988 的帖子+ G/ Y5 F- S: \4 W5 [5 H* s! G

你是不是打算浓缩Lentivirus，来提高它的滴度, 为下步感染实验做准备? q4 T. V; w. \
还是要浓缩Lentivirus 的RNA？5 T4 N6 D1 I$ D4 s- x5 d8 n
8 l! R* Q! Q6 X8 E
若是为了提高病毒滴度可以超速离心的方法：[attach]34974[/attach]

若是为了浓缩RNA，可以冷冻干燥，或沉淀RNA后再溶解，等等。# e6 m- h; |) X

补充内容 (2011-11-1 19:54):
在这个超速离心的protocol 里用的是sucrose, 没有用PEG，可能和你实验室计划不同。

作者: huangcong1988 时间: 2011-11-2 15:56

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1 r! C8 C+ a- n& K" F) p
非常感谢！我是为了浓缩慢病毒

作者: huangcong1988 时间: 2011-11-2 16:44

回复 john7812x 的帖子

文章中好像是收集慢病毒的过程吧，当然高速离心能在一定程度上提高慢病毒滴度，但是浓缩。。。

作者: wscookie 时间: 2012-7-9 15:44

学习一下

作者: 徒手撩萝莉 时间: 2017-11-30 16:55

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