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标题:
小RNA的反转录疑问
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作者:
如来的观音
时间:
2011-11-6 16:30
标题:
小RNA的反转录疑问
本人偶得一份小RNA的反转录的protocol：
# E/ C7 `4 T8 m. _
反应体系20uml，
, C/ X9 I5 T* f" b% d( N
反应条件
+ l" X' D* R2 L
前面的加颈环温度为65℃/5min,0℃/2min
9 }! I- ]) q: s8 K
逆转录为：
4 E8 G" }; B& `# C, D! D+ Y+ o
16℃，30min
8 K& N. K9 h; k3 J8 [5 F& A4 ^
30℃,30s
7 |! v1 {( x9 l0 q
42℃，30s
! O. I( T0 K8 k2 T( u) t
50℃，1s
0 r% O8 B/ G; X1 V! p m
70℃，10-15min
$ K4 U" i3 s! T
0℃，pause，30/42/50s60个循环。就是不知道这些步骤的代表意思，哪步是孵育哪部是变性失活呢，谢谢指点
作者:
langziforever
时间:
2011-11-6 18:27
我觉得这个猜起来有些难，毕竟小RNA的反转录和其他的RNA反转录过程是不一样的！最好有更详细的信息，比如用的什么酶？
0 e% m, {. z: s" Q( N
所以，最好有更详细的信息提供！
作者:
绿雪
时间:
2011-11-6 18:35
反转录过程的条件是根据反转录酶来设置的，不同公司生产的反转录酶也有差别的。做的时候要根据自己买的试剂说明来。
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