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标题: 关于细胞计数的问题 [打印本页]

作者: meggie 时间: 2011-11-8 12:23 标题: 关于细胞计数的问题

最近关于细胞计数的方法，发现大家各有不同的方法，用一般的细胞计数板的话，细胞需要稀释多少倍，一滴是多少量，然后数格子的时候是怎么数，然后怎么算，大家给个完整可靠的方法，谢谢

作者: zx314 时间: 2011-11-8 13:47

cell line 稀释多一些，原代少一些，你可以先从10被稀释开始，若计数格中细胞数目太密，在稀释10倍，若细胞压格子只计算左上和左侧的数目（也可只计算相反的的），格中的一个细胞代表乘10000个.4格细胞数目加和除4，我一般取10微升计数。

作者: wangzhiqi86 时间: 2011-11-8 15:11

稀释倍数不定，稀释后一个小格子的细胞数为30-40个时，数出来的细胞数最为准确，血球计数板的放大倍数为1×104，八个小格子的细胞数数出来之后取平均值，乘以10000，再乘以稀释倍数，即为目标细胞密度。

作者: yangwy028 时间: 2011-11-8 17:20

脐血干细胞贴壁性很强，越稀释越不准。间充质还可以尽量稀释的，如果重叠得多了就数不清楚了

作者: cgc123 时间: 2011-11-8 19:58

血球计数板用盖玻片盖好后，跟你的加液量没有关系，计数区的体积都是1μm3。计数的稀释倍数要根据自己细胞的大概浓度了。

作者: 紫电苍炎 时间: 2011-11-8 22:47

我这边计数一般不用稀释一般都是数有核细胞先1:1破红然后加10ul的样一般样品细胞数少就数全部4个大个子 10倍物镜如果细胞量大就数几个小格子 40倍物镜

作者: yglky 时间: 2011-11-8 22:49

本帖最后由 yglky 于 2011-11-8 22:51 编辑
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稀释倍数可以根据细胞离心收集后沉淀量多少来依据经验判断。对于比较宝贵的细胞，数量不多的情况下，其实可以将收集的用10ml以内培养基进行稀释，直接去测定，这样可以减少细胞损失，而且操作方便。

作者: tigerfish 时间: 2011-11-9 09:05

如果你真的要纠结的话，可以尝试做个1-100倍稀释，分10个浓度的实验，
数十次，画log曲线，曲线比较直的部分就是比较好的数细胞浓度了

P.S.* E: F7 Q8 l3 ^# b
如果你真的做了，希望你能把结果分享出来，呵呵

作者: fananran2003 时间: 2011-11-9 09:47

我们计数一般都稀释10倍，细胞悬液混匀后取10ul，然后取90ul培养液混匀，计4个大格（64个小格）后，除以4乘以10000就是所需密度了，压线的数左不数右，数上不数下，粘连到一起的记为一个，其实挺简单的，做几次就好了，主意的一小点就是，向上面加细胞悬液的量要适当，不要过多、过少，过多，玻片下液体会流动，过少，不能铺满4个大格子，

作者: dongxin 时间: 2011-11-9 10:22

一般细胞数在10^5-10^6之间就可以吧，所以你最好是根据镜下的细胞数来调整你的稀释倍数，
细胞计数：
   计数板的处理：用无水乙醇或95%乙醇冲洗计数板后，用干净绸布或是擦镜纸擦净，同时擦净计数板的盖玻片，把盖玻片覆在计数板上面；1 e! P( f& l" \( W4 `: Z
   加细胞悬液：用无菌细口吸管吸取一滴细胞悬液（细胞悬液也可先进行稀释，在最后计算细胞数时应乘以稀释倍数），从计数板边缘缓缓滴入，使之充满计数板和盖片之间的空隙（注意不要使液体流到旁边的凹槽或是带有气泡）。4 p/ _, a; i& G3 p
   计数：在镜下观察计数四角大方格内的细胞数，只计数完整的细胞，若聚成团的细胞则按一个计数，此外在一个大方格内的细胞有压在线上的则计上不计下，计左不计右。
   计算：细胞数/mL=4个大格细胞总数/4×10000，若计数前稀释则要乘以稀释倍数。
供参考，祝好运！

作者: lunyuyuanxj 时间: 2011-11-9 10:33

1、稀释倍数视细胞多少而定，太多数起来太费劲，太少会产生较大误差；9 A& z' k3 c1 r" a
2、计数时一般计数四个角的四个大方格，若想降低误差可多数几个大方格，计数原则：数上不数下，数左不数右；
3、细胞总数=A*B*C*10000（A：平均每大方格细胞数，B：稀释倍数，C：稀释前细胞悬液总体积数（ml)

作者: vickyhouyu 时间: 2011-11-9 13:11

最适合数的浓度是一个小方格中有1个细胞，那么一个中方格中有16个细胞，一个大方格（0.1ul体积）中有400个细胞，也就是最适浓度是400万/毫升。
一般不确定细胞的浓度就用少量的PBS先稀释，取10ul滴到计数板上看一下，推算一下要稀释多少倍比较合适。& i0 t9 e# e b6 m W( g, [
我一般数的时候为了好算一些，就数四个角的中方格和正中间的一个中方格。这样5个中方格的细胞数加起来的数乘以5 ，得到的数n就是每毫升有n万个细胞。( Y7 T3 N* T9 V$ W
祝实验顺利！

作者: song58 时间: 2011-11-11 11:45

我倒觉得如果对计数要求很高的话，可以使用其他一些计数的仪器，例如Millipore的Scepter

作者: laputave 时间: 2012-5-14 15:41

我在计数时发现加样量不同会影响到计数我只做过10ul和20ul的量，发现加入20ul时，距离加样孔较远的两个大格子中的细胞数多于距离较近的两个大格子中的细胞数接近一倍的数目~~这些有影响吗？我实验室菜鸟一枚，求前辈指点迷津

作者: nculsa747 时间: 2012-7-6 14:30

本帖最后由细胞海洋于 2012-7-6 15:47 编辑 " _# j/ y% D" f1 i8 {$ D% m

看文档不如看视频，

http://share.vrs.sohu.com/my/v.swf&autoplay=false&id=21851195&skinNum=4&topBar=1&xuid=
现在都用计数枪或仪来计数了，如Millipore的secepter2，只是它不能区分死细胞，要用PBS溶解细胞才行；

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