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标题: 刚买回来的条件敲出鼠大家都做鉴定吗？ [打印本页]
作者: echowdk    时间: 2011-11-14 17:29     标题: 刚买回来的条件敲出鼠大家都做鉴定吗？

实验室刚买回来几只条件敲除鼠，以前没做过类似实验，经验太少。大家帮忙说说需要做哪些实验？
作者: dilal    时间: 2011-11-14 19:58

保险起见，做一下鉴定，PCR检测即可不是很难
作者: dilal    时间: 2011-11-14 20:02

问一下你的条件敲出鼠是从国外公司买的，还是通过国内的代理？贵吗？自己找公司做基因敲出小鼠好像得15万。
作者: dilal    时间: 2011-11-14 20:02

问一下你的条件敲出鼠是从国外公司买的，还是通过国内的代理？贵吗？自己找公司做基因敲出小鼠好像得15万。
作者: echowdk    时间: 2011-11-14 20:39

回复 dilal 的帖子. `, Z# i- w. B8 A1 b0 E: q4 ]6 \

0 I. q2 Z3 y, Q' ]是从jackson lab 买的，比15万要贵。要是组织特异性表达的敲除小鼠，是不是还要让它跟rosa鼠交配一下，更精确一点？
作者: 爱鬼鬼    时间: 2011-11-14 21:30

本帖最后由 爱鬼鬼 于 2011-11-14 21:49 编辑 ' M% C& b: ^0 Y4 B

" H+ B4 U$ C5 v4 [/ \+ x8 G3 b) o2 p条件敲除一般运用loxp位点与cre酶作用+ Q. Y) _5 }# \. X
jackson买过来的小鼠，应该是纯合子，你可以交配产生下一代，看下一代是不是杂合子；直接拿买来的小鼠也可以取外耳廓组织（大于10天的小鼠有痛觉，不宜剪取尾巴），jackson网页中有pcr的引物和条件。当然这个是用作基因型鉴定。+ w/ t  N& Y  f' `8 \
如果实在不放心可以看loxp位点插在基因的什么部位，pcr出来，连个载体，送测序，看插入的loxp是否完整，是否在所要的的位置。
作者: bobo198666    时间: 2011-11-14 22:18

目前对于knockout小鼠做鉴定只有pcr和southern两种，pcr不够准确，需测序才知道。southern则不太好做。如果是条件性敲除小鼠，一般是cre与loxp的，需杂交拿到纯合子再交配发挥功能
作者: echowdk    时间: 2011-11-14 22:38

回复 bobo198666 的帖子2 Q+ M, }: ~3 G# O" t
2 D% a  W  W9 h' X& t/ P
是人家给做好的，拿到手之后还用再做southern吗，简单的验证下不行吗？另外，拿到纯合子再交配是必须的吗，是不是得根据实验目的决定？
作者: echowdk    时间: 2011-11-14 22:41

回复 爱鬼鬼 的帖子
! s) }& J. o1 W" X8 a8 E4 K: [  R9 o5 `
哦，我买的是cre小鼠，不带loxp的，所以你说的如果不成立。谢谢~~
作者: bobo198666    时间: 2011-11-15 10:28

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- P5 r8 P. l# Q5 l$ B) u: g/ N4 j' f( R
如果是从公司买的，pcr鉴定测序就够了，基因和纯合子都能鉴定出来
作者: echowdk    时间: 2011-11-15 10:33

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% W" ^' J' o0 ?- S7 j4 Z( a! Y$ ^8 u7 r+ |/ [
那那种组织特意性表达Cre酶的小鼠，是不是最好还要和Rosa鼠杂交鉴定一下？
作者: echowdk    时间: 2011-11-15 10:33

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- B. j* `; _% R8 t6 s3 {, ^+ L6 a, ~1 o
那那种组织特意性表达Cre酶的小鼠，是不是最好还要和Rosa鼠杂交鉴定一下？
作者: echowdk    时间: 2011-11-15 10:33

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8 Q$ {3 A8 J; q0 O' x% W0 r5 m3 _( [* V% j" {% Y: |
那那种组织特意性表达Cre酶的小鼠，是不是最好还要和Rosa鼠杂交鉴定一下？
作者: bobo198666    时间: 2011-11-15 10:42

回复 echowdk 的帖子( |* r- j* b2 D: m1 l, {3 |3 N

& }. D9 G3 Y, }" J* H. B5 x你们有rosa- loxp-stop-loxp-EGFP report小鼠吗
作者: echowdk    时间: 2011-11-15 12:20

回复 bobo198666 的帖子* S& e  H7 _: Y3 `6 g  _! G( a
7 E1 s3 _; L5 d3 W: ^
没有。但是其他实验室应该有，就是要起来比较麻烦，而且不知道人家会不会给。不过我们的cre酶小鼠还带有GFP基因，是不是切个片子看一下就OK了？
作者: bobo198666    时间: 2011-11-15 13:19

回复 echowdk 的帖子3 E9 \) d: `: c

; o% Q0 ~* j( a7 `pcr测序就可以了，不用那么麻烦吧
作者: echowdk    时间: 2011-11-15 13:30

回复 bobo198666 的帖子1 `7 u4 ]6 J6 }6 H9 z: p/ S

5 v& d# C4 Q" \+ s% ~3 qok知道了谢谢啊
作者: shylook    时间: 2011-11-15 13:46

尾巴剪下来一段 拉个pcr 测序
作者: echowdk    时间: 2011-11-15 18:17

回复 dilal 的帖子
' n9 u: M2 }  g& p# A5 H* O  d- `+ e) {3 e" r- C
啊，我答错了一个问题。无敌sorry……
. ?/ V6 R8 f7 x8 t! [" U! |我的是cre鼠可能稍微便宜点，才4万块。" J% T: p/ C. r7 Y, g
但是，我们这边的老师说现做一只的话是10万，也比你的15万要便宜。
作者: jieniao1    时间: 2011-11-15 18:27

我们实验也在jackson Lab 买的小鼠，应该要充分相信人家的，PCR鉴定一下就行了，那个现在是最好的转基因鼠的实验室了！德国的布伦瑞克的亥姆霍兹有个实验室做转基因鼠也可以的.
作者: echowdk    时间: 2011-11-15 19:59

回复 jieniao1 的帖子
6 x- h. h9 q6 U# v/ Q2 q/ ~
: d* o8 B: E8 v8 A3 i相信是一方面，严谨又是另一方面，不冲突的。不能盲目相信~~
9 w# z! o' ]8 H1 ?# Z哦~德国也有啊，长见识了。
作者: renqing001    时间: 2011-11-16 16:25

回复 echowdk 的帖子+ n5 W4 P" J; E

& D) i5 S& C& \+ T% G$ D" V; \最好与ROSA小鼠交配，后代用PCR筛选两者均阳性的后代，用lacZ染色验证是否在特定组织中有表达，这样才确定你的小鼠好不好用？到不一定非要做southern之类的
作者: echowdk    时间: 2011-11-16 17:39

回复 renqing001 的帖子  K( B# l1 ]+ i8 U4 _9 S

# |* Z7 l# R( H1 \$ N恩，同意。
+ V8 T" z. q/ W, R谢谢~~



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