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标题: 成年小鼠成纤维细胞培养 [打印本页]

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作者: 超级小葵    时间: 2011-11-16 15:39     标题: 成年小鼠成纤维细胞培养

新手。现在在做成年小鼠尾尖的成纤维细胞培养，今天是第8天，剪碎后用15%FBS的DMEM培养基培养，到第4天的时候长出来这些东西，跟文献网络上描述的成纤维细胞形态不一样，想请教高手看一下，这是什么细胞！非常感谢。[attach]35614[/attach]

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作者: yanjie11678    时间: 2011-11-16 15:53

应该不是细胞，成体组织块培养细胞应该不会这么快迁出。看你照的照片这些东西和组织块好像不在一个面上啊。

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作者: 超级小葵    时间: 2011-11-16 16:36

回复 yanjie11678 的帖子1 [0 f9 L0 D# t) ?5 P' K# w

0 Y7 j- w, T1 {- D/ \错了，这图是第六天照的，如果这不是细胞，那是什么呢？为什么说组织和细胞不在一个面上，组织本来剪的不是很小

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作者: jhu132llh    时间: 2011-11-16 16:59

1.细胞形态不对，请确定焦距没问题，有点疑似对焦不在细胞层面的问题+ k$ U7 i1 J3 G7 Q+ ?6 e
2.成纤维细胞将会在3天内大量游离，3天左右将会生长到汇合度50-70%，尤其是组织块周围将会及其密集。9 \! s# O- C" r8 V" k3 R
3.组织培养在培养前期（前2天）请小心少动，过多移动组织皿将影响组织块的贴壁，组织块的贴壁情况直接影响细胞游离生长。

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作者: song58    时间: 2011-11-16 17:08

话说怎么感觉有点点像keratinocyte ...

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作者: yanjie11678    时间: 2011-11-16 17:10

其它组织块周围也有这样的东西吗？是不是你照相时调焦距的问题？我看组织块的边缘很模糊，怀疑这些东西不在细胞层面上。

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作者: 超级小葵    时间: 2011-11-16 17:22

jhu132llh 发表于 2011-11-16 16:59 " a3 t' |: G7 l5 F' z4 S
1.细胞形态不对，请确定焦距没问题，有点疑似对焦不在细胞层面的问题- r% X/ a' B: ]
2.成纤维细胞将会在3天内大量游离，3 ...

( h% g4 q4 d7 X: R) \
我的培养方法应该没问题吧% H- s; b4 P& h" b. K, ^: I
小鼠尾尖，剪碎后，在培养箱放半个小时左右，让其贴壁，然后加入培养基（15%FBS+DMEM+1%双抗）
- D) y( |& M7 Q; p1 b, B  |我每天都拿出来观察，组织贴壁不是太牢

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作者: 超级小葵    时间: 2011-11-16 17:26

回复 yanjie11678 的帖子
8 G8 f1 S: y* R& \- D, e
( h' I7 h" y7 u难道不是因为组织块比较大的原因吗？

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作者: 超级小葵    时间: 2011-11-16 22:20

:'(生气啊

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作者: jhu132llh    时间: 2011-11-17 09:38

回复 超级小葵 的帖子+ ^- Z( f) t2 H) [- X7 z

5 u% {: Y+ K- z; M' e  I: v3 O掏老窝子技巧，个人尝试好多方法后总结出来的，你可以试试
' E" G) G& Q- f/ J/ e1 J1.可以这样，先加一点培养基，在培养皿中晃一晃让培养液均匀铺在皿底，然后加入组织块，培养
2 c$ K5 h% M4 \! s% j5 h, A2.6-8小时后沿边缘极其缓慢加入剩余培养液
# u4 j" _" ~- C! {3 l, J. ~3 t# c3.2天不动它
$ |& s7 d/ M/ ~; g2 Y/ ~2 w4.这个是总我结了很久的较难培养的组织培养的组织培养技巧，大部分的难培养的组织培养都高效，希望对你有效

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作者: guo6259    时间: 2011-11-17 10:16

个人感觉焦距没调好，4 a. H4 L: Q3 ?4 H0 Z: f+ T5 a! C
这么长时间如果有成纤维从组织长出来的话形态也不对啊。
/ H) g; h& r) h3 c- T, B而且和楼主老移动关系也不是很大。$ S% y. b2 m9 R; Y

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作者: 274996064    时间: 2011-11-17 10:27

我觉得你那就不是细胞，应该是剪得太细小得组织。) \6 ~0 k2 H, C& G
我觉得你得再培养几天看看

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作者: 超级小葵    时间: 2011-11-17 10:45

回复 274996064 的帖子1 d" G" \4 f7 x" y' b
, k( Q: P( T, M3 v, D  E
可是刚开始的几天没见到这些东西啊，是后来才有的

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作者: 超级小葵    时间: 2011-11-17 10:46

回复 guo6259 的帖子
" Y  R8 O6 @! U# X0 ]) G# K+ S6 Y
6 `' \3 Q+ ]) {, b焦距？焦距不调好会有这么大的关系吗

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作者: 超级小葵    时间: 2011-11-17 10:47

回复 jhu132llh 的帖子2 A+ {# V2 _: Z7 \2 ^
, S3 R* M) A% L; j
非常感谢，我今天用你的这个方法试试看

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作者: majing217    时间: 2011-11-17 10:49

这个和细胞不在一个界面上，是不是杂质啊
+ G/ K  M+ i" c

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作者: 超级小葵    时间: 2011-11-17 10:52

回复 majing217 的帖子( B# S) U5 N2 y$ ?7 [. }# f9 J

$ ^& M, Y( A6 [; i:'(严重不知道

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作者: majing217    时间: 2011-11-17 11:25

我觉得如果在镜下观察室不移动的，就是杂质。
" d/ [: Z7 P2 e5 P% y

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作者: sguy    时间: 2011-11-17 15:30

如果是成纤维细胞的话应该会紧贴组织块周围慢慢向周围扩散生长而不会单独在某一区域出现，第六天的时候细胞已经大面积出现了，但是还没到极致。一般刚开始加液两天或者三天换液就行。贴壁我都是37°十分钟什么都不加，十分钟组织块基本全部贴上了，加液也不会漂。

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作者: ponder    时间: 2011-11-17 16:06

肯定不是成纤维细胞，你看看NIH3T3的细胞形态就知道了

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作者: 超级小葵    时间: 2011-11-17 22:01

回复 majing217 的帖子! B" [  d1 n. I- c$ f

; N" U( |) O* m. X？？？
% {/ X8 f. H* |5 p不移动才是杂质？

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作者: 超级小葵    时间: 2011-11-17 22:02

回复 sguy 的帖子
9 ]; @9 H6 }2 h8 p  `
# J$ ]* [- v# Z! f9 b# A; i我放了2小时，都没有完全贴壁，这是怎么回事啊？你处理过培养瓶吗？

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作者: majing217    时间: 2011-11-18 08:34

回复 超级小葵 的帖子
6 Y. R  w7 X+ K
: M; B; @5 W" y0 p$ |$ x; W$ S就是如果这个在培养液里不移动，就有可能是杂质。

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作者: sguy    时间: 2011-12-15 16:32

回复 超级小葵 的帖子6 S2 R" L1 j4 U0 v3 d
/ f: p4 P7 l5 Y
贴壁很好贴得，你可以倒悬，也可以倾斜放置，等组织块周边的液体干掉了，组织块也就贴了，如果时间不够长，加液的时候飘了，那就永远也不会贴了……

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作者: luckywen    时间: 2012-7-17 23:13

像角质形成细胞。

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