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标题: 细胞周期测定中的细胞碎片 [打印本页]

作者: wangzhiqi86 时间: 2011-11-22 10:45 标题: 细胞周期测定中的细胞碎片

我最近在做细胞周期的测定，但是由于我的细胞是重悬在水凝胶当中，不知道是回收问题还是本来就是这样，在流式图给出之后，发现细胞碎片很多，有的甚至会达到50%多，不知道这样得到的G1、G2和S期的数据还是否真实，也就是说它是否能反映出细胞的真实情况？先谢谢各位了！

作者: leisong12 时间: 2011-11-22 11:13

流式不是能够通过设门排除细胞碎片的干扰么？怎么还会有这样的问题，除非你的细胞太散了，根本找不到要分析的细胞主群，那样也就无法测周期的数据了，否则应该可以的。

作者: wangzhiqi86 时间: 2011-11-22 12:58

回复 leisong12 的帖子
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我把样送到老师那里的时候，专门问了能不能排除细胞碎片的影响，她说做不到。关键是，我现在拿到手的数据是不是反映了细胞的真实情况？碎片对最终结果影响大吗？

作者: leisong12 时间: 2011-11-22 15:28

一来如果你有图的话，可能我们能帮你判断一下；另外排除碎片本就是流式分析过程中的必要步骤之一，怎么说做不到，我不理解。

作者: wangzhiqi86 时间: 2011-11-22 19:16

回复 leisong12 的帖子7 {) [/ s# S. v2 k% w6 z
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细胞碎片达到50%以上，能帮忙分析一下吗？非常感谢！

图片附件: 图片1.jpg (2011-11-22 19:15, 15.85 KB) / 下载次数 217
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MzU5MDV8OThjN2RiMjZ8MTc0ODY0MTA2OXww

作者: hany2007 时间: 2011-11-22 21:09

第一，考虑是否细胞消化过度。
第二，考虑收集细胞时是否吹打过度. t7 O! k8 N# O1 ~) q P- _
第三，考虑离心收集细胞时转速是否过高

作者: wangzhiqi86 时间: 2011-11-23 10:16

回复 hany2007 的帖子! `3 T# k. \8 G# G- C: k
- W/ i8 k2 P& x5 [
非常感谢，那我把转速降一降，之前离心转速有4000rpm，应该就是这个原因了

作者: zxcv12345 时间: 2011-11-24 07:52

回复 wangzhiqi86 的帖子$ k" \& R. Y6 l0 _* p) d n# K: \4 i
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800转离心对细胞来说已经足够了

作者: hany2007 时间: 2011-11-24 11:05

转速最高不要超过1500rpm，我一般用800rpm，3分钟。
关键是看你未处理的对照组，若是对照组也出现大量的细胞碎片，那么就是你的操作有问题。

作者: leisong12 时间: 2011-11-25 09:17

从FSC－SSC散点图可以看个大概，另外离心速度4000rpm显然太大，离心速度以rfc确定比较好，大概200g*5分钟就可以了，毕竟各实验室离心机型号不一样，说角速度不太可靠。

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