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标题:
还是成纤维细胞培养的问题
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作者:
超级小葵
时间:
2011-11-24 09:52
标题:
还是成纤维细胞培养的问题
之前发过帖子，成纤维细胞一直没有培养出来。
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会不会和老鼠的年龄有关系呢，我取样的老鼠年龄有两百多天了？
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求高手帮帮忙！
作者:
yangpan521
时间:
2011-11-24 10:09
小鼠皮肤成纤维细胞都是用12.5天的胎鼠，采用胰酶消化法制作而成，很好长出。也可用成体鼠的成纤维一般用组织块培养法，不过不易长出。敢问为何不用胎鼠做呢？
作者:
超级小葵
时间:
2011-11-24 10:14
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yangpan521
的帖子
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老板让做成年鼠的，我用的就是组织块培养法，已经做了好多次，但就是不见细胞有长出来
作者:
xiaomingxu
时间:
2011-11-24 10:38
难是难一点，但还是可以培养出的，可能还是你分离方法的原因。
作者:
超级小葵
时间:
2011-11-24 16:49
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xiaomingxu
的帖子
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分离方法？求解！
作者:
274996064
时间:
2011-11-24 17:12
我觉得和小鼠的年龄是没有关系的。成年小鼠也是可以用胰酶消化法来做的，合作胎鼠的方法一样。这样可以得到更多的细胞。
作者:
超级小葵
时间:
2011-11-24 17:18
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274996064
的帖子
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8 c! R9 }( @( }; v7 @+ K
组织块消化吗？要消化多长时间呢？
作者:
274996064
时间:
2011-11-24 17:31
我试过半个小时 我做的效果不错
作者:
超级小葵
时间:
2011-11-24 17:47
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274996064
的帖子
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2 A6 C1 Z5 ^# j2 N; T
组织之前有处理过吗？胰酶的浓度是多少吗？
作者:
xiangchou812
时间:
2011-11-24 19:16
用的老鼠也真够老的!呵呵。应该可以分享出来的，只是可能需要时间长点（十天左右吧）。
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另外，如果加液晚的话，组织块太干了，也不会有细胞迁出的
作者:
274996064
时间:
2011-11-24 19:47
可以剪碎一点儿 用平常的胰酶浓度就可以了
作者:
liufutang
时间:
2011-11-24 20:22
老鼠是有点老了 我所试过的用6周的小鼠采用组织爬出的方法很好 现在已经培养半年基本建系了。要是消化方法的话我建议用0.125浓度来消化。
作者:
liufutang
时间:
2011-11-24 20:22
老鼠是有点老了 我所试过的用6周的小鼠采用组织爬出的方法很好 现在已经培养半年基本建系了。要是消化方法的话我建议用0.125浓度来消化。
作者:
varing
时间:
2011-11-24 20:28
剪碎点，用0.25%的胰酶消化15-20min，肯定有组织块，直接加到培养皿中，加常规培养液体积的1/3-1/2左右，培养液不要太多，让组织块贴好，第二天或者第三天贴好后加培养液至常规体积。
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这个应该可以的
作者:
超级小葵
时间:
2011-11-24 21:57
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liufutang
的帖子
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, J2 P" _0 j5 W( r) r
谢谢
作者:
超级小葵
时间:
2011-11-24 21:58
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varing
的帖子
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: n2 {2 d. J7 u" n( o) a
好的，我试试，非常感谢
作者:
天枰2012
时间:
2011-11-25 10:12
用的老鼠也真够老的!呵呵。应该可以分享出来的，只是可能需要时间长点（十天左右吧）。
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另外，如果加液晚的话，组织块太干了，也不会有细胞迁出的
请问十天左右是指贴壁时间吗？如果是贴壁时间怎么会这么长，还有人的又会是什么情况呢？
作者:
jane2011
时间:
2011-11-25 12:34
组织块第二天就贴壁了，如果是人的，4天左右会有HFF爬出，13天左右收获HFF，爬出时间也根据取材人的年龄有所不同。还有你的皮肤组织处理的是否干净，如果有很多结缔组织或脂肪残留，也不容易爬出细胞。没做过鼠的，上面是人的皮肤的经验。
作者:
kastanie
时间:
2011-11-29 11:19
做过好几次取皮肤原代成纤维细胞的试验了。个人感觉能不能成功最重要的一步是皮肤的组织碎块是不是贴壁。
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我取的是人的皮肤成纤维细胞，没有加胰酶消化。具体步骤是：将皮肤减成小块，培养皿中放10min左右略微晾干，让皮肤快粘在培养皿壁上，然后缓缓加入少量培养基，37度培养，隔天再小心补点培养基，开头2-3天尽量不要去动培养皿，不要过多观察，防止组织块飘起来，一旦飘起来，我的经验是基本就成功不了了。
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