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标题: 还是成纤维细胞培养的问题 [打印本页]

作者: 超级小葵 时间: 2011-11-24 09:52 标题: 还是成纤维细胞培养的问题

之前发过帖子，成纤维细胞一直没有培养出来。
会不会和老鼠的年龄有关系呢，我取样的老鼠年龄有两百多天了？
求高手帮帮忙！

作者: yangpan521 时间: 2011-11-24 10:09

小鼠皮肤成纤维细胞都是用12.5天的胎鼠，采用胰酶消化法制作而成，很好长出。也可用成体鼠的成纤维一般用组织块培养法，不过不易长出。敢问为何不用胎鼠做呢？

作者: 超级小葵 时间: 2011-11-24 10:14

回复 yangpan521 的帖子
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老板让做成年鼠的，我用的就是组织块培养法，已经做了好多次，但就是不见细胞有长出来

作者: xiaomingxu 时间: 2011-11-24 10:38

难是难一点，但还是可以培养出的，可能还是你分离方法的原因。

作者: 超级小葵 时间: 2011-11-24 16:49

回复 xiaomingxu 的帖子7 X" G7 H) b7 `) Z0 L& _9 S H

分离方法？求解！

作者: 274996064 时间: 2011-11-24 17:12

我觉得和小鼠的年龄是没有关系的。成年小鼠也是可以用胰酶消化法来做的，合作胎鼠的方法一样。这样可以得到更多的细胞。

作者: 超级小葵 时间: 2011-11-24 17:18

回复 274996064 的帖子

组织块消化吗？要消化多长时间呢？

作者: 274996064 时间: 2011-11-24 17:31

我试过半个小时我做的效果不错

作者: 超级小葵 时间: 2011-11-24 17:47

回复 274996064 的帖子6 r A3 @' L Y- `( m

组织之前有处理过吗？胰酶的浓度是多少吗？

作者: xiangchou812 时间: 2011-11-24 19:16

用的老鼠也真够老的!呵呵。应该可以分享出来的，只是可能需要时间长点（十天左右吧）。
另外，如果加液晚的话，组织块太干了，也不会有细胞迁出的

作者: 274996064 时间: 2011-11-24 19:47

可以剪碎一点儿用平常的胰酶浓度就可以了

作者: liufutang 时间: 2011-11-24 20:22

老鼠是有点老了我所试过的用6周的小鼠采用组织爬出的方法很好现在已经培养半年基本建系了。要是消化方法的话我建议用0.125浓度来消化。

作者: varing 时间: 2011-11-24 20:28

剪碎点，用0.25%的胰酶消化15-20min，肯定有组织块，直接加到培养皿中，加常规培养液体积的1/3-1/2左右，培养液不要太多，让组织块贴好，第二天或者第三天贴好后加培养液至常规体积。0 l* T3 n% z2 l! [) [% Q
这个应该可以的

作者: 超级小葵 时间: 2011-11-24 21:57

回复 liufutang 的帖子% h9 @% r( \+ Z, H3 S

谢谢

作者: 超级小葵 时间: 2011-11-24 21:58

回复 varing 的帖子
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好的，我试试，非常感谢

作者: 天枰2012 时间: 2011-11-25 10:12

用的老鼠也真够老的!呵呵。应该可以分享出来的，只是可能需要时间长点（十天左右吧）。/ g) y( x8 H0 ~* \# t; j
另外，如果加液晚的话，组织块太干了，也不会有细胞迁出的

请问十天左右是指贴壁时间吗？如果是贴壁时间怎么会这么长，还有人的又会是什么情况呢？

作者: jane2011 时间: 2011-11-25 12:34

组织块第二天就贴壁了，如果是人的，4天左右会有HFF爬出，13天左右收获HFF，爬出时间也根据取材人的年龄有所不同。还有你的皮肤组织处理的是否干净，如果有很多结缔组织或脂肪残留，也不容易爬出细胞。没做过鼠的，上面是人的皮肤的经验。

作者: kastanie 时间: 2011-11-29 11:19

做过好几次取皮肤原代成纤维细胞的试验了。个人感觉能不能成功最重要的一步是皮肤的组织碎块是不是贴壁。 `- Q* u% C' ^" E0 d8 z7 B& U% A
我取的是人的皮肤成纤维细胞，没有加胰酶消化。具体步骤是：将皮肤减成小块，培养皿中放10min左右略微晾干，让皮肤快粘在培养皿壁上，然后缓缓加入少量培养基，37度培养，隔天再小心补点培养基，开头2-3天尽量不要去动培养皿，不要过多观察，防止组织块飘起来，一旦飘起来，我的经验是基本就成功不了了。

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