干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 微孔板实验如何减少"边缘效应" [打印本页]

作者: Temin 时间: 2011-11-24 19:52 标题: 微孔板实验如何减少"边缘效应"

各位大虾，大家在用96-或/和384-微孔板做cell-based assay的时候，是否会遇到边缘效应（Edge Effect），表现出来的效应一般是边缘的一圈well读值异常，我观察和请教了周边的人，大家对这种效应的处理，一般有这几种方式：
1、周围一圈微孔放弃不用，不种细胞，而是铺上培养基或者水；6 J: E! G9 v. V2 [2 x; H! l- T
2、Microplate在CO2培养箱培养时，周围用加样槽或者其他容器装水，使得microplate周围的湿度加大；: z5 x4 h& B1 K# y: z7 j. G
3、Microplate放入培养箱之前，先在室温平衡30min或者60min，待细胞贴壁之后再将microplate放入培养箱；( O) R) M7 H* P& Q. r0 V
4、方法2和方法3的组合。2 K0 H* o& D* p! N. `
根据经验，不同的细胞类型，边缘效应的影响各异；对24h的实验来讲，边缘效应有些细胞可能影响极微，但是对有些细胞来讲，影响极大，甚至都不能开关培养箱门（这个见有人单独霸占一个培养箱，里面就放着他的几块96孔板）；而对72h或者更长培养时间的实验，边缘效应一般很大，经常导致周围的一圈微孔不能使用。5 b* M( b1 x, j1 I) S: D. ~( Q6 {
那么，我一直很想知道，边缘效应的原因是什么，在上述方法2的理念里，是因为蒸发效应，导致培养基里水分减少，渗透压等理化因素变化，影响细胞的生长，所以在周围加水增加湿度，可以减少边缘效应。在上述方法3的理念里，是因为温度不平衡，骤然把微孔板从室温放入37度，那么周边孔更早升温，而这个时候细胞还在沉降，会向边缘的温度高的地方飘去降落，造成细胞密度局部加大，因为细胞的接触抑制，所以边缘的孔里面细胞生长速度减慢，所以造成边缘效应。
我觉得两种说法都有道理，但是，在实际当中，边缘效应还是无法避免，只能降到一个差不多可以接受的水平（相对微孔板中央位置，差异10%以内。）
所以，我想请教大家，你们是怎么操作的？对于边缘效应的理论又是什么？谢谢！
附件中是一篇关于边缘效应的文章，供大家参考。A Simple Technique for Reducing Edge Effect in Cell-Based Assays

附件: [A Simple Technique for Reducing Edge Effect in Cell-Based Assays] J Biomol Screen-2003-Lundholt-566-70.pdf (2011-11-24 19:51, 164.28 KB) / 下载次数 29
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MzU5ODh8YTIxOGY5ZDl8MTc5MDcwNTk4OHww

作者: shen_coco 时间: 2011-11-24 19:59

我一般都只采用第一种方法，就是最外面的孔加PBS，确实存在一定的边缘效应

作者: naturalkillerce 时间: 2011-11-24 20:36

回复 Temin 的帖子* q v9 ^4 g' c* I. _

这个学习一下，平时做实验时，经常用到，谢谢楼主分享。

作者: hkenb 时间: 2011-11-24 20:44

在用EDTA传代时，也发现类似的“边缘效应”。孔边上细胞贴得很牢，但是中间基本没有贴。中间没有贴，可能是处理时间有点过的原因，但是边上贴得很牢就不好解释了。请教大虾！

作者: Temin 时间: 2011-11-24 20:49

回复 hkenb 的帖子

坐等大虾～～～

作者: aulenuyah 时间: 2011-11-25 00:02

下来看看

作者: bin 时间: 2011-11-27 10:59

第一次听说边缘效应，不过以前用96孔板时周围一圈是不用的，加无菌水，好像是为了防止中心的孔板内液体蒸发。

作者: phdyhm 时间: 2011-11-27 14:34

在酶联免疫反应（ELISA）中常发现有“边缘效应”，即96孔板的外周孔显色较中心孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因。孔板的聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。　　* ^/ I1 g3 J3 E& S
解决办法是使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可提高测定的重复性。

作者: luoziwei 时间: 2011-11-27 16:16

回复 Temin 的帖子

楼主，给你补充一个，还有低氧造成的，就是氧气在孔板内分布不均。很多学生做实验都知道有这种影响存在，也知道周边一圈不种细胞，但没几个愿意查明原因，说明楼主很细心嘛。

作者: Temin 时间: 2011-11-27 18:29

回复 luoziwei 的帖子8 r: J, e+ J% @* z
0 _( M4 } {2 v: D3 A' `3 w
谢谢你的建议，氧气的因素应该也很大，你那里有相关的文献资料吗？

作者: luoziwei 时间: 2011-11-28 08:59

回复 Temin 的帖子# k3 L- o* x) X2 d. u7 b' n
0 \- U7 O9 a. D& X* M; E8 n
文献我倒是没有，不好意思

作者: zsm19830921 时间: 2012-3-15 14:24

很有参考价值呀，最近试验遇到了些问题，感谢LZ

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)